表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体的构建

王晓丽; 邵卫星; 田夫林; 单虎

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表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体的构建

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根据文献设计2对引物,PCR扩增FPV复制非必需区中外源基因插入位点两侧翼的片段,分别克隆到pUC19和pSK质粒中,并命名为pFP1和pFP2.根据文献设计引物,PCR扩增鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的GB基因的编码区.将GB基因克隆到质粒pFP1中获得重组质粒pFP1-GB;用酶切质粒pEGFP,得到GFP片段并克隆到质粒pFP2中,得到重组质粒pFP2-GFP.双酶切pFP1-GB得到FP1-GB片段,并克隆到质粒pFP2-GFP中,得到重组质粒pFP1GB-FP2GPF.酶切质粒pE/L-7.5,获得背向连接的2个鸡痘病毒启动子片段--PE/L-7.5,并将该片段克隆到重组质粒pFP1GB-FP2GPF获得重组质粒pGB-GFP,该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒.在质粒pGB-GFP中,2个背向连接的启动子被克隆到的GB和GFP基因之间,分别启动GB和GFP基因的表达.经酶切和测序鉴定pGB-GFP,启动子PE/L和P7.5已分别正确地插入到GB和GFP基因之间,分别启动外源表达基因GB和筛选标记基因GFP的表达,从而证明已获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体pGB-GFP.该载体为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因的重组鸡痘病毒奠定基础.

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来源
《中国动物检疫》 |2008年第6期|27-30|共4页
作者
王晓丽; 邵卫星; 田夫林; 单虎;
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作者单位

青岛农业大学,266109;

中国动物卫生与流行病学中心,青岛,266032;

山东省畜牧兽医检验技术中心,济南,250022;

青岛农业大学,266109;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂;
关键词
鸡传染性喉气管炎病毒; 糖蛋白GB基因; 重组鸡痘病毒; 转移载体;

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