流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化

张孝忠; 刘一凡; 谷思颖; 余娜; 段彦祥; 李有文

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流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化

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为了表达流行性乙型脑炎(epidemic encephalitis type B)非结构蛋白NS1,本研究通过PCR扩增了日本乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)P3株NS1基因,并分别构建了其融合表达His和GST标签的原核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用IPTG诱导表达了NS1融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定,并用尿素变性复性和镍亲合层析法纯化目的蛋白.结果显示,试验成功构建了NS1的两个原核表达载体pET-42b-NS1和pGEX-KG-NS1,P3株N S1基因全长1056 bp,以包涵体的形式表达约40 ku的蛋白,尿素变性复性效果较好,镍亲合层析纯化得到纯度和浓度均较高的NS1蛋白.JEVNS1基因可以通过原核表达系统高效表达蛋白并纯化得到高纯度产物,为后期生物学功能研究奠定基础.

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来源
《中国畜牧兽医》 |2018年第8期|2320-2326|共7页
作者
张孝忠; 刘一凡; 谷思颖; 余娜; 段彦祥; 李有文;
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作者单位

塔里木大学动物科学学院 ,阿拉尔843300;

塔里木大学动物科学学院 ,阿拉尔843300;

塔里木大学动物科学学院 ,阿拉尔843300;

塔里木大学动物科学学院 ,阿拉尔843300;

塔里木大学动物科学学院 ,阿拉尔843300;

塔里木大学动物科学学院 ,阿拉尔843300;

新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室 ,阿拉尔843300;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类正股单股RNA病毒;
关键词
流行性乙型脑炎病毒(JEV); NS1基因; 克隆; 蛋白表达; 蛋白纯化;

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