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冬凌草甲素对骨肉瘤细胞MG63增殖和凋亡的影响及其可能机制

         
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目的研究冬凌草甲素(ORI)对人骨肉瘤细胞MG63增殖和凋亡的作用及可能机制。方法实验组用不同浓度ORI(10、20、30、40、50μmol/L)处理,对照组采用等量二甲基亚砜(DMSO)处理;结晶紫染色检测MG63细胞增殖;Western blot检测增殖、凋亡指标及β-连环蛋白(β-catenin);流式细胞技术检测细胞凋亡;T细胞因子4/淋巴增强因子(TCF4/LEF)萤光素酶报告质粒分析Wnt信号的影响;半定量PCR检测β-catenin的表达。结果10μmol/L ORI结晶紫染色及定量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),20~50μmol/L ORI均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);10μmol/L ORI高于20~50μmol/L ORI,20μmol/L ORI高于30~50μmol/L ORI,30μmol/L ORI高于40、50μmol/L ORI,40μmol/L ORI高于50μmol/L ORI,差异均有统计学意义(P<0.05)。PCNA表达水平实验组均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。caspase-3、Cleaved-caspase-3、Bad表达水平,实验组各浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2表达水平,各实验组均高于对照组,20、30μmol/L ORI低于10μmol/L ORI,30μmol/L ORI低于20μmol/L ORI,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组β-catenin表达均低于对照组,20、30μmol/L ORI低于10μmol/L ORI,30μmol/L ORI低于20μmol/L ORI,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组凋亡细胞明显增加,而在30μmol/L ORI时有所减少,但细胞坏死增多明显。各实验组TCF4/LEF报告质粒的转录活性均低于对照组,20、30μmol/L ORI低于10μmol/L ORI,30μmol/L ORI低于20μmol/L ORI,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组β-catenin表达量均低于对照组,20、30μmol/L ORI低于10μmol/L ORI,30μmol/L ORI低于20μmol/L ORI,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ORI能够抑制MG63细胞增殖并诱导其凋亡,这可能与ORI抑制该细胞内Wnt信号有关。

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