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建立测定兔眼角膜中盐酸特比萘芬含量的甲醇浸提-HPLC法

         
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目的:建立测定兔眼角膜中盐酸特比萘芬含量的方法.方法:取日本大耳白兔18只,随机分为6组,每组3只,双眼给予0.2％盐酸特比萘芬滴眼液50μl.分别于给药后15、30、60、120、240、480 rin时处死兔,剖取角膜,加入甲醇,充氮气,密封冷藏静置浸泡24 h后,涡旋,离心,取上清液采用高效液相色谱法测定其中盐酸特比萘芬的含量.色谱柱为Waters X-BridgeC18,流动相为甲醇-水(92∶8),流速为0.7 ml/min,检测波长为224啪,柱温为40℃,进样量为20 μl.结果:在兔眼角膜醇浸提液中盐酸特比萘芬检测质量浓度在0.007 64～0.382 μg/ml(r=0.999 8,n=6)范围内与峰面积呈良好的线性关系;方法回收率为99.6％ (RSD=4.5％,n=3),提取回收率为98.5％～103.2％ (RSD=6.8％～11.0％,n=3);日内RSD为4.1％(n=5),日间RSD为4.5％(n=5).给药480 min后仍可测得盐酸特比萘芬,其质量浓度为(0.102±0.043 3)μg/ml.结论:本方法专属性强、准确度高,可用于兔眼角膜中盐酸特比萘芬的含量测定.

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