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化风丹药母指纹图谱的建立及不同发酵时间样品中7种核苷类成分的含量测定

         
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目的:建立化风丹药母的指纹图谱,并测定不同发酵时间样品中7种核苷类成分的含量.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Pntulips BP-C18,流动相为甲醇-水(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为35℃,进样量为10μL.以黄嘌呤为参照,绘制12批化风丹药母的HPLC指纹图谱;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价,确定共有峰;同法测定不同发酵时间(0、1、2、3、4周)样品中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷的含量.结果:12批化风丹药母共有8个共有峰,相似度为0.712～0.954;指认了7种成分,分别为尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷.不同发酵时间样品中上述7种成分检测质量浓度的线性范围分别为0.87～8.7μg/mL(r=0.9996)、1.51～15.1μg/mL(r=0.9997)、6.08～60.8μg/mL(r=0.9995)、1.52～15.2μg/mL(r=0.9996)、1.82～18.2μg/mL(r=0.9996)、1.48～14.8μg/mL(r=0.9996)、1.63～16.3μg/mL(r=0.9993);定量限分别为0.0274、0.0763、0.2504、0.1723、0.1011、0.0783、0.0842μg/mL,检测限分别为0.0087、0.0255、0.0079、0.0841、0.0357、0.0269、0.0275μg/mL;精密度、重复性、稳定性(12 h)试验的RSD均小于3％;加样回收率分别为94.16％～100.16％(RSD=2.24％,n=6),93.87％～100.65％(RSD=2.67％,n=6),93.52％～99.66％(RSD=2.30％,n=6),93.67％～98.24％(RSD=1.89％,n=6),96.00％～102.18％(RSD=1.96％,n=6),94.62％～101.54％(RSD=2.82％,n=6),97.72％～104.56％(RSD=2.97％,n=6).发酵0～4周时,上述7种成分及总核苷的含量分别为0.042～0.232、0.027～0.181、0.039～0.651、0.026～0.225、0.034～0.111、0.009～0.124、0.079～0.099、0.647～1.292 mg/g;发酵1～4周时的尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤及总核苷的含量均较发酵0周时显著升高,而尿苷、肌苷、鸟苷的含量较发酵0周时显著降低.结论:所建指纹图谱特征性强且操作简便,可用于化风丹药母的质量控制;含量测定方法准确、可靠,可用于同时测定其中7种核苷类有效成分的含量;化风丹药母中的核苷类成分含量受发酵时间的影响.

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