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MALAT1靶向调控miR-205与骨肉瘤侵袭的实验研究

         
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目的 探讨人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)与miR-205的关系,揭示MALAT1促进骨肉瘤发生发展的分子机制.方法 实时荧光定量PCR(QPCR)法检测骨肉瘤组织、癌旁正常组织、人成骨细胞(hFOB)以及骨肉瘤MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205的表达;生物信息学及荧光素酶实验观察MALAT1对miR-205的靶向调控;miR-205mimics转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测MALAT1表达,si-MALAT1转染Sao-2和MG63细胞后QPCR检测miR-205表达;miR-205 mimics和si-MALAT1分别转染MG63细胞,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Western blotting检测MMP-2、MMP-9表达.结果 骨肉瘤组织、癌旁正常组织中MALAT1和miR-205表达量分别为4.7±0.6、2.6±0.08和2.2±0.09、3.7±0.3,差异有统计学意义(P＜0.05);MG63、Sao-2细胞株中MALAT1和miR-205表达量分别为2.4±0.7、2.1±0.05和0.53±0.04、0.47±0.02,与hFOB中的0.9±0.01、0.82±0.04比较,差异有统计学意义(P＜0.05);生物信息学及荧光素酶检测显示MALAT1序列中存在miR-205的3个互补序列,且两者存在靶向调控作用;转染si-MALAT1的Sao-2和MG63细胞中miR-205的表达量分别为3.4±0.7、3.8±0.6,对照组为1.4±0.5、1.0±0.1,差异有统计学意义(P＜0.05);转染miR-205 mimics的Sao-2、MG63细胞中MALAT1的表达量分别为0.51±0.05、0.42±0.03,而对照组为1.5±0.7、1.28±0.4,差异有统计学意义(P＜0.05);Transwell实验结果显示miR-205 mimics组MG63细胞侵袭数为(28.52±3.68)个,低于miR-205 mimics与pMALAT1共转染组的(42.63±5.67)个,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting结果显示miR-205 mimics组MMP-2、MMP-9的表达量分别为0.41±0.02、0.49±0.04,显著低于miR-205与pMALAT1共转染组的0.73±0.01、0.80±0.05,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MALAT1与miR-205之间存在双向抑制关系,MALAT1通过抑制miR-205的表达促进骨肉瘤细胞的侵袭.

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