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首页> 中文期刊> 《临床肿瘤学杂志》 >lncRNA FOXC2-AS1逆转骨肉瘤细胞对阿霉素耐药性的影响

lncRNA FOXC2-AS1逆转骨肉瘤细胞对阿霉素耐药性的影响

         
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目的 探讨沉默长链非编码RNA FOXC2-AS1(lncRNA FOXC2-AS1)对人骨肉瘤细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响及可能作用机制.方法 采用ADM长期浓度梯度递增法体外建立ADM耐药细胞株MG-63/ADR,利用实时荧光定量PCR(QPCR)法检测MG-63和MG-63/ADR细胞中FOXC2-AS1的表达水平,采用阴性对照序列和si-FOXC2-AS1序列转染MG-63/ADR细胞作为si-NC组和si-FOXC2-AS1组,另设空白对照组.MTT实验和平板克隆形成实验检测各组细胞对ADM的敏感性,并计算半数抑制浓度(IC50).Western blotting法检测各组细胞中Notch-1及下游靶因子Hes-1、Hey-1、Hey-2蛋白水平.结果 体外成功建立MG-63/ADR耐药细胞株,1、5、25、125、625、3125、15 625 ng/ml ADM对MG-63/ADR细胞的增殖抑制率分别为(5.90±0.48)％、(9.86±0.85)％、(16.75±2.21)％、(29.84±2.98)％、(50.45±4.96)％、(54.82±5.33)％和(57.69±5.76)％,明显低于MG-63细胞.ADM对MG-63和MG-63/ADR的IC50分别为106.55 ng/ml和685.47 ng/ml.MG-63/ADR耐药指数为6.43.si-FOXC2-AS1组FOXC2-AS1的相对表达量为0.44±0.12,低于空白对照组(1.43±0.22)和si-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).1、5、25、125、625、3125和15 625 ng/ml ADM对si-FOXC2-AS1组MG-63/ADR细胞的增殖抑制率分别为(6.36±0.40)％、(13.41±1.05)％、(32.45±2.69)％、(49.73±4.14)％、(64.82±4.67)％、(77.56±5.79)％和(79.50±5.62)％,明显高于空白对照组.转染si-FOXC2-AS1后MG-63/ADR细胞对ADM的敏感性增加了4.25倍.si-FOXC2-AS1组经ADM(100 ng/ml)作用96 h后,MG-63/ADR细胞克隆形成率为(27.64±7.28)％,低于空白对照组的(76.07±17.91)％和si-NC组的(69.83±15.71)％,差异有统计学意义(P＜0.05).si-FOXC2-AS1组MG-63/ADR细胞中Notch-1及其下游分子Hes-1、Hey-1、Hey-2蛋白的表达水平分别为0.67±0.15、0.52±0.10、0.45±0.12和0.38±0.11,均低于空白对照组和si-NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默lncRNA FOXC2-AS1表达通过抑制Notch-1信号通路的活化,进而增加MG-63/ADR细胞对ADM的敏感性.

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