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ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响

         
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摘要

目的 本研究构建精子相关抗原6 (SPAG6)基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM,并使其在CHO细胞中表达,观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响.方法 利用NCBI数据库,寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区,分析全长蛋白序列,检索出SPAG6有7个ARM区域.利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中,对阳性克隆进行酶切和测序鉴定,将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,分别提取细胞蛋白进行Western blot检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位.结果 酶切和测序鉴定表明,全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功,转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达,但仅全长表达产物定位于微管,缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位.结论 SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长.该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础.

著录项

  • 来源
    《中国男科学杂志》 |2015年第1期|3-8|共6页
  • 作者

    汪智琼; 张玲; 石玉琴; 李红飞; 张志兵;

  • 作者单位

    武汉科技大学医学院公共卫生学院 武汉430065;

    华中科技大学同济医学院附属同济医院;

    武汉科技大学医学院公共卫生学院 武汉430065;

    武汉科技大学医学院公共卫生学院 武汉430065;

    武汉科技大学医学院公共卫生学院 武汉430065;

    武汉科技大学医学院公共卫生学院 武汉430065;

    Virginia Commonwealth University, Richmond,VA;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 R698.2;R394.33;
  • 关键词

    精子相关抗原6基因; ARM结构域; 不育,男性;

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