番鸭IFN-α mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

万春和; 朱海侠; 陈红梅; 施少华; 傅光华; 程龙飞; 黄瑜

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番鸭IFN-α mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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根据GenBank中鸭IFN-α基因(GenBank登录号:JF894229)序列设计并合成引物,并以鸭β-actin基因(GenBank 登录号:GU564232)为内参,采用SYBR Green I染料法,建立检测鸭IFN-α mRNA的实时荧光定量Real-time PCR方法(RTPCR).将IFN-α和β-actin基因分别克隆至pMD 18-T载体上,鉴定出阳性重组质粒为标准品(p-IFN-α和p-β-actin),分别建立番鸭IFN-α和β-actin实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明,Ct值在13.27～27.54与11.86～25.32范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.99 (r＞0.99),扩增产物的熔解曲线分析均各自只出现1个特异性单峰,无引物二聚体,Tm值分别为(93.6±0.26)℃和(85.3±0.15)℃,最低检测限分别为9.37×102 copies/μL和3.71 × 101copies/μL,检测周期从样品的处理到荧光定量PCR结束仅需4h左右.本研究建立的鸭IFN-α基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为番鸭IFN-α mRNA的定量分析奠定了基础.

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来源
《中国动物传染病学报》 |2012年第4期|63-68|共6页
作者
万春和; 朱海侠; 陈红梅; 施少华; 傅光华; 程龙飞; 黄瑜;
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作者单位

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

福建农林大学动物科学学院,福州350002;

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

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正文语种 chi
中图分类 S858.322.4;
关键词
实时荧光定量RT-PCR; 番鸭; IFN-α; β-actin;

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