长效CRISPR/Cas9基因编辑结局的动态追踪研究

张硕; 周雨潇; 吴海波; 索伦

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长效CRISPR/Cas9基因编辑结局的动态追踪研究

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旨在通过构建体外细胞模型研究在长效CRISPR系统作用下基因编辑的动态结局,为在体生殖系长效编辑提供研究支持。本研究以FANCF和VEGFA基因为例,通过慢病毒随机整合的方式构建了一套长效表达CRISPR/Cas9的细胞模型,并以该模型为对象研究长效CRISPR系统作用下,基因编辑效率和修复的动态结局。在FANCF和VEGFA基因外源靶点区域,随着Doxycycline诱导时间的增加,CRISPR/Cas9的编辑效率逐渐升高,并分别于第4天(FANCF)、第3天(VEGFA)编辑效率达到峰值;其次,对应上述靶区的内源靶点的达到峰值的时间点与外源靶点基本一致,但内源靶点的编辑效率显著高于外源靶点(P<0.0001);再次,对靶点编辑产物序列分析发现,在编辑的第4~7天,各靶点编辑产物的删除、插入及其它类型呈稳定状态,内、外源各位点编辑结局中删除、插入以及其它类型的占比趋势一致;最后,对FANCF靶点潜在的6个脱靶位点进行检测,均未发现任何脱靶现象。长效CRISPR/Cas9技术的编辑效率在第3或第4天达到峰值,各基因编辑结局类型占比趋势一致,且在FANCF位点上不会增加脱靶风险。

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来源
《畜牧兽医学报》 |2023年第10期|4196-4208|共13页
作者
张硕; 周雨潇; 吴海波; 索伦;
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作者单位

上海交通大学医学院附属第九人民医院;

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正文语种 chi
中图分类 S811.3;
关键词
CRISPR/Cas9; 基因编辑; 动物育种;

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