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变异猪流行性腹泻病毒M和N融合双基因的原核表达及表达产物免疫原性分析

         
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摘要

The aim of this study was to construct a double gene fusion plasmid of the membrane(M)and nucleocapsid(N)genes of variant porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)and analyze the immunogenicity of the expressed proteins.The M and N genes were amplified by PCR from PEDV variant isolate,FJFQ2014(GenBank No.KJ646580).First,the M gene was cloned into pEASY-Blunt E2(pE2)vector to construct pE2-M plasmid.Then the amplified N gene and E2-M gene of expression vector pE2-M were cloned into the prokaryotic expression vector,resulting a recombinant plasmid pE2-M-N.The plasmid was transformed to Transetta(DE3)for protein expression.The expressed product was identified by SDS-PAGE and Western blot.The BLAB/c mice were immunized with the purified PEDV M-N protein and the antibody titer was determined by ELISA.The results indicated that PEDV M-N fusion protein was successfully expressed in Transetta(DE3)and had immunogenicity,and induced anti-PEDV antibody in mice.The pE2-M-N plasmid of variant PEDV was constructed and expressed successfully.This study lays a foun-dation for the development of the serodiagnostic methods and immunology research for PEDV.%旨在构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的 M和N双基因融合质粒,并分析表达蛋白免疫原性.通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株(GenBank登陆号KJ646580)的 M基因和 N 基因,将 M基因克隆至 pEASY-Blunt E2(pE2)表达载体,构建出pE2-M质粒.利用同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将 N基因克隆至E2-M片段,转化到Trans 1-T1感受态细胞中,构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化 Transetta(DE3),表达出相应的融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况.将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性.结果表明:扩增出 M和 N基因,成功构建了pE2-M 质粒,并将 E2-M基因与N基因进行有效连接,构建出pE2-M-N融合双基因质粒,表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白,该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体.变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建,为进一步开展变异PEDV 的诊断技术和免疫学等研究,奠定良好基础.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2018年第6期|1249-1255|共7页
  • 作者

    王隆柏; 王晨燕; 吴学敏; 陈秋勇; 车勇良; 陈如敬; 周伦江;

  • 作者单位

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

    福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福州350013;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜免疫学;
  • 关键词

    猪流行性腹泻病毒; PEDV; M基因; N基因; 双基因表达;

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