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兔肝细胞中与RHDV VP60P2亚区相互作用蛋白质的筛选和初步鉴定

         

摘要

兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60 P2亚区在病毒感染宿主细胞过程中可能起重要作用,为找寻RHDV靶细胞——兔肝细胞中与P2亚区相互作用的蛋白质,以原核表达的P2蛋白为诱饵蛋白质,通过免疫共沉淀试验(Co-IP)结合质谱分析筛选与之有相互作用的肝细胞蛋白质.经分析选取层黏连蛋白受体(LamR)蛋白做进一步研究.提取兔肝细胞总RNA,反转录扩增LamR基因,将其插入pGEX-6p-1载体,经IPTG诱导表达,获得GST-LamR融合蛋白,并通过GST pull-down试验验证LamR蛋白与P2蛋白的结合.结果显示,以P2蛋白为诱饵蛋白质,免疫共沉淀试验结合质谱分析共筛选到26个与P2存在相互作用的肝细胞蛋白质,其中LamR蛋白是多种病毒的受体.通过原核表达系统表达了LamR蛋白,经pull-down试验验证了LamR蛋白与P2蛋白有直接的相互作用.本研究证实兔肝细胞LamR蛋白与RHDV VP60 P2蛋白的相互作用,为深入研究RHDV的感染过程、揭示RHDV的致病机制提供了线索.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2016年第3期|549-558|共10页
  • 作者单位

    南京农业大学动物医学院,南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    南京农业大学动物医学院,南京210095;

    南京农业大学动物医学院,南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

    江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,南京210014;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 病毒病;
  • 关键词

    兔出血症病毒(RHDV); VP60 P2亚区; 免疫共沉淀; 层黏连蛋白受体(LamR);

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