奶牛圆形、长形、成熟精子细胞微量RNA制备和含量分析

任小霞; 陈晓丽; 李秀岭; 王艳; 秦彤; 王栋

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奶牛圆形、长形、成熟精子细胞微量RNA制备和含量分析

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本研究旨在探究奶牛变形精子细胞获取方法、建立稳定奶牛精子RNA提取体系及分析单个生精细胞RNA含量变化.采用激光显微捕获技术结合冰冻切片,采集奶牛圆形、长形精子细胞样品,利用附睾尾精子浮游法获得成熟精子,通过对已报道的小鼠、奶牛及人类精子RNA制备方法的尝试和比较,获得RNeasy Kit最佳奶牛精子RNA制备方法,并用PicoPure RNA Isolation Kit对圆形和长形精子细胞进行RNA制备,筛选去除白细胞、上皮细胞等体细胞污染及基因组DNA污染的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,并对生精细胞RNA含量进行单因素方差分析.结果表明,激光显微切割技术可有效捕获圆形、长形精子细胞;通过RNeasy Kit获得的牛精子RNA纯度高、质量好,单个精子RNA含量为0.023～0.025 pg;同时,随精子细胞变形,其RNA含量显著降低,其中圆形精子到成熟精子RNA含量降低75倍.本研究从复杂样品取样、微量RNA细胞转录本制备与检测等方面,为精子发生与变形机理研究提供重要参考.

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来源
《畜牧兽医学报》 |2016年第8期|1546-1554|共9页
作者
任小霞; 陈晓丽; 李秀岭; 王艳; 秦彤; 王栋;
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作者单位

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室,北京100193;

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室,北京100193;

北京市大兴区动物疾病控制中心,北京102600;

北京市大兴区动物疾病控制中心,北京102600;

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室,北京100193;

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室,北京100193;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类畜禽繁殖;
关键词
生精细胞; 转录本; 激光显微切割; 附睾; 表达;

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