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脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达

         

摘要

为了探索脾酪氨酸激酶(Syk)是否参与酿酒酵母甘露聚糖(S.c M)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的过程,首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况;然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化,同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平;接着用3条Syk特异性siRNAs(#1、#2和#3)转染ORECs 24 h后,qPCR检测Syk mRNA的表达变化,筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA;最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后,采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化,以确定Syk在S.cM诱导SBD-1表达过程中的作用.结果显示:Syk在ORECs内表达;且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显著高于未刺激组(P<0.01或P<0.05),S.c M刺激ORECs不同时间(5、15、30、45和60 min)均能使Syk发生磷酸化,且刺激15 min后磷酸化水平达到最大(P<0.01);此外,Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低,且Syk siRNA#2的抑制效果最明显(P<0.01);同时Syk siRNA#2和R406均能极显著降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达(P<0.01).上述结果表明,Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达.

著录项

  • 来源
    《畜牧兽医学报》 |2019年第5期|1082-1090|共9页
  • 作者

    金鑫; 张曼; 杨银凤;

  • 作者单位

    内蒙古农业大学兽医学院;

    呼和浩特010018;

    农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室;

    呼和浩特010018;

    内蒙古农业大学兽医学院;

    呼和浩特010018;

    农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室;

    呼和浩特010018;

    内蒙古农业大学兽医学院;

    呼和浩特010018;

    农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室;

    呼和浩特010018;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜免疫学;
  • 关键词

    酿酒酵母甘露聚糖; 绵羊β-防御素-1; 瘤胃上皮细胞; Syk;

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