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树突细胞miR-17调节初始CD4^(+)T淋巴细胞分化Treg/Th17失衡机制的研究

     
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目的:探讨微小RNA-17(miR-17)调节肺结核患者外周血树突细胞(dendritic cells,DC)对初始CD4^(+)T淋巴细胞分化为调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)及辅助性T细胞17(T help cell 17,Th17)的作用及分子机制。方法:采集2022年2月1日至4月30日在浙江大学医学院附属杭州市胸科医院收治的肺结核患者20例(肺结核组)和同期的门诊健康体检者20名(健康对照组)的外周血,采用qPCR检测两组DC中miR-17表达水平。将肺结核组患者的成熟DC与健康对照组的初始CD4^(+)T淋巴细胞共同培养后分别加入miR阴性对照物(miR阴性对照组)、miR-17模拟物(miR-17模拟物组)和miR-17抑制剂(miR-17抑制剂组)。采用流式细胞仪检测上述3组共同培养细胞中Treg细胞和Th17细胞的分化比例,采用qPCR检测初始CD4^(+)T淋巴细胞中的Eos mRNA转录水平,并利用蛋白免疫印迹法检测Eos mRNA表达。结果:肺结核组DC的miR-17基因表达水平(12.546±1.572)明显高于健康对照组DC的表达水平(2.409±1.097),差异有统计学意义(t=28.356,P<0.05)。miR-17模拟物组的Treg细胞比例(4.740%±0.901%)明显低于miR阴性对照组(59.235%±4.652%),差异有统计学意义(t=50.755,P<0.01);miR-17模拟物组的Th17细胞比例(67.610%±3.495%)明显高于miR阴性对照组(27.645%±2.075%),差异有统计学意义(t=38.521,P<0.01)。miR-17抑制剂组的Treg细胞比例(83.080%±5.770%)明显高于miR阴性对照组(59.235%±4.652%),差异有统计学意义(t=14.988,P<0.01);miR-17抑制剂组的Th17细胞比例(11.405%±1.777%)明显低于miR阴性对照组(27.645%±2.075%),差异具有统计学意义(t=27.044,P<0.01)。miR-17模拟物组的初始CD4^(+)T淋巴细胞内Eos mRNA基因转录水平(0.181±0.123)下调至38.4%,明显低于miR阴性对照组(0.471±0.217),差异有统计学意义(t=10.449,P<0.05);miR-17抑制剂组的初始CD4^(+)T淋巴细胞内Eos mRNA基因转录水平(0.889±0.295)上调至1.887倍,明显高于miR阴性对照组(0.471±0.217),差异有统计学意义(t=16.635,P<0.05)。miR-17模拟物组的初始CD4^(+)T淋巴细胞内Eos相对表达量(3.626±1.319)减少至77.7%,明显低于miR阴性对照组(4.664±1.456),差异有统计学意义(t=8.528,P<0.05);miR-17抑制剂组的初始CD4^(+)T淋巴细胞内Eos相对表达量(6.148±1.701)增加至1.318倍,明显高于miR阴性对照组(4.664±1.456),差异有统计学意义(t=8.035,P<0.05)。结论:DC miR-17调节初始CD4^(+)T淋巴细胞分化Treg/Th17失衡从而参与结核分枝杆菌感染的过程。

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