用克隆池PCR法筛选小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL基因组TAC文库获得抗病基因候选克隆

秦跟基; 陈佩度; 刘耀光; 方玉达; 刘大钧

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用根据抗病基因保守区设计的一对简并性引物,从小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL cDNA中PCR扩增获得一个具有抗病基因核苷酸结合位点( Nucleotide binding site, NBS)结构特点的DNA片段克隆N7.从小麦-簇毛麦易位系6vS/6AL基因组TAC(Transformation-competent artificial chromosome, TAC)文库的22块96孔板提取所有2112个克隆池(每个池含约1000个克隆)的质粒,再根据N7的核苷酸序列设计一对特异引物,用克隆池PCR(pooled PCR)法经分级筛选从文库中获得一个阳性克隆.以N7为探针,通过Southem杂交证实了该TAC克隆为真正含有抗病候选基因的克隆.研究结果表明克隆池PCR法对克隆数目巨大的基因组文库的筛选很有效.

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来源
《生物工程学报》 |2002年第3期|313-317|共5页
作者
秦跟基; 陈佩度; 刘耀光; 方玉达; 刘大钧;
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作者单位

南京农业大学细胞遗传所,南京,210095;

南京农业大学细胞遗传所,南京,210095;

华南农业大学生命科学学院遗传工程研究室,广州,510642;

南京农业大学细胞遗传所,南京,210095;

南京农业大学细胞遗传所,南京,210095;

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正文语种 chi
中图分类植物细胞遗传学;
关键词
小麦-簇毛麦易位系; 小麦基因组TAC文库; 克隆池PCR筛选; 抗病候选基因;

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