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慢生型大豆根瘤菌的结瘤基因转入快生型大豆根瘤菌中

         

摘要

通过三亲本杂交把慢生型大豆根瘤菌USDA110的基因文库转移至Tn5诱变的不结瘤的快生型大豆根瘤菌321,338中,用链霉素和四环素平板选择大量接合子,接种大豆,通过结瘤基因功能互补,获得7个根瘤,从中分离出的每个菌株都仍具有链霉素和四环素抗性。分离其质粒,发现每个菌株都多了一条较载体质粒pLAFR1分子量大的质粒。将这些质粒转移至大肠杆菌HB101中,分离其质粒,用^(32)P标记的nod探针进行DNA-DNA分子杂交,除载体质粒pLAFR1为阴性反应外,其他重组质粒均为阳性反应,即所获得pLAFR1克隆的DNA片段上确有nod结构基因。回收重组质粒pLAFR1::nod,用限制性内切酶EcoR Ⅰ进行酶切,从其琼脂糖凝胶电泳图上估计pLAFR1上克隆的DNA片段分子量为32kb。

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