有效抑制小鼠小胶质细胞上Toll样受体9表达的siRNA的筛选

杨碧莹; 彭晴霞; 潘经锐; 王艺东

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有效抑制小鼠小胶质细胞上Toll样受体9表达的siRNA的筛选

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目的筛选有效抑制小鼠小胶质细胞(BV-2细胞)上Toll样受体9(TLR9)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。方法设计并合成针对TLR9的3对siRNA(siRNA-836、siRNA-1549和siRNA-2410)及一条带绿色荧光标记(FAM)的通用阴性对照FAM-siRNA。在X-treme GENE siRNA转染试剂介导下转染BV-2细胞。倒置荧光显微镜下观察转染后BV-2细胞FAM-siRNA的分布,流式细胞仪检测转染效率,q-PCR检测TLR9的mRNA表达,Western blot检测TLR9蛋白的表达,并比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA。CCK-8检测细胞存活率的变化。结果 BV-2细胞转染FAM-siRNA后6 h,胞质内可见绿色荧光分布。FAM-siRNA表达阳性率为(91.87±4.77)%。转染TLR9 siRNA后,BV-2细胞中TLR9 mRNA表达明显下降。与阴性对照组及序列siRNA-836、siRNA-2410相比,序列siRNA-1549的TLR9沉默效能最高,使BV-2细胞上TLR9 mRNA表达于24 h和48 h分别降低(77.89±4.23)%和(65.36±11.07)%,TLR9蛋白表达分别下降(48.37±20.56)%和(44.30±14.31)%。CCK-8检测TLR9 siRNA转染组与对照组相应时间点比较,BV-2细胞存活率无明显变化(P>0.05)。结论序列siRNA-1549对BV-2细胞上TLR9表达的抑制效果最大,利用RNA干扰处理BV-2细胞,对细胞基本无毒性作用。

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来源
《中华脑科疾病与康复杂志（电子版）》 |2014年第6期|45-48|共4页
作者
杨碧莹; 彭晴霞; 潘经锐; 王艺东;
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作者单位

中山大学孙逸仙纪念医院神经科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类糖尿病;
关键词
小神经胶质细胞; RNA; 小分子干扰; Toll样受体9;

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