蓬子菜总黄酮对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

董均明; 马英丽; 张紫阳; 李瑞; 朱玉良; 马玲

摘要

目的探讨蓬子菜总黄酮（FGVL）对过氧化氢所致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用及其机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为5组,包括对照组（加入1640完全培养基）、损伤组（加入100μmol/L过氧化氢培养4 h）、FGVL 1组（12.5 mg/L FGVL培养24 h后,加入100μmol/L过氧化氢培养4 h）、FGVL 2组（25.0 mg/L FGVL培养24 h后,加入100μmol/L过氧化氢培养4 h）和FGVL 3组（50.0 mg/L FGVL培养24 h后,加人100μmol/L过氧化氢培养4 h）。采用硝酸还原酶法检测细胞上清液中的一氧化氮含量,ELISA检测细胞上清液中的6-酮-前列腺素1α（6-keto-PGF1α）、血栓烷素B2（TXB2）、白细胞介素-6和白细胞介素-22的分泌水平,RT-PCR检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的mRNA表达水平,Western bolt检测磷酸化Akt(ser473)和磷酸化eNOS(ser1177)的蛋白表达水平,并观察细胞凋亡情况。结果（1）损伤组细胞上清液中的一氧化氮含量为（34.11±1.78）μmoL/L,低于对照组的（74.81±2.93）μmol/L（P＜0.05）;FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的一氧化氮含量分别为（41.86±2.32）μmol/L和（62.79±1.16）μmol/L,均高于损伤组（P均＜0.05）。（2）损伤组细胞上清液中的6-keto-PGF1α含量为（44,84±3.87）ng/L,低于对照组的（82.38±3.98）ng/L（P＜0.05）;FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的6-keto-PGF1α含量分别为（52.76±1.78）ng/L、（56.58±1.44）ng/L和（67.78±2.02）ng/L,均高于损伤组（P均＜0.05）。损伤组细胞上清液中的TXB,含量为（43.37±3.96）ng/L,高于对照组的（25.56±1.75）ng/L（P＜0.05）;FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的TXB2含量分别为（32.41±1.68）ng/L和（28.23±2.15）ng/L,均低于损伤组（P均＜0.05）。（3）损伤组细胞上清液中的白细胞介素-6和白细胞介素22的含量分别为（539.74±11.63）ng/L和（43.60±2.44）ng/L,均高于对照组[白细胞介素-6含量为（288.67±19.52）ng/L,白细胞介素-22含量为（23.70±3.05）ng/L,P均＜0.05];FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的白细胞介素-6含量分别为（502.11±6.18）ng/L、（457.33±14.30）ng/L和（361.02±11.67）ng/L,均低于损伤组（P均＜0.05）;FGVL 2组和FGVL 3组细胞上清液中的白细胞介素-22含量分别为（38.23±1.97）ng/L和（21.89±3.59）ng/L,均低于损伤组（P均＜0.05）。（4）损伤组细胞中的PI3K和eNOS mRNA相对表达水平分别为0.68±0.09和0.22±0.03,均低于对照组（PI3K mRNA为0.81±0.12,eNOS mRNA为0.63±0.11,P均＜0.05）;FGVL 2组和FGVL 3组细胞中的PI3K mRNA相对表达水平分别为0.76±0.03和0.83±0.06,均高于损伤组（P均＜0.05）;FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL3组细胞中的eNOS mRNA相对表达水平分别为0.37±0.08、0.53±0.04和0.56±0.09,均高于损伤组（P均＜0.05）。各组细胞中的Akt mRNA相对表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。（5）损伤组细胞中的磷酸化Akt(ser473)和磷酸化eNOS(ser1177)蛋白相对表达量分别为0.48±0.05和0.23±0.03,均低于对照组[磷酸化Akt(ser473)为0.71±0.12,磷酸化eNOS(ser1177)为0.66±0.05,P均＜0.05];FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL 3组细胞中的磷酸化Akt(ser473)蛋白相对表达量分别为0.54±0.04、0.69±0.07和0.73±0.09,均高于损伤组（P均＜0.05）;FGVL 1组、FGVL 2组和FGVL3组细胞中的磷酸化eNOS(ser1177)蛋白相对表达量分别为0.53±0.05、0.71±0.10和0.65±0.07,均高于损伤组（P均＜0.05）。（6）损伤组的细胞凋亡率为（63.67±11.37）%,高于对照组的（4

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