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藁本内酯对重组人热休克蛋白60诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制

         

摘要

目的探讨藁本内酯(LIG)对重组人热休克蛋白60(HSP60)诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制。方法 THP-1细胞经佛波酯诱导分化为巨噬细胞后,以免疫荧光法筛选出髓样分化因子88(MyD88)的siRNA最佳转染浓度。将巨噬细胞分为6组(n=3),包括空白对照组(siRNA转染试剂)、模型组(siRNA转染试剂+HSP60 10 mg/L)、阴性对照组(MyD88阴性对照品+HSP60 10 mg/L)、RNAi组(MyD88 siRNA+HSP60 10 mg/L)、LIG组(siRNA转染试剂+HSP6010 mg/L+LIG 20 mg/L)和RNAi+LIG组(MyD88 siRNA+HSP60 10 mg/L+LIG 20 mg/L)。采用Western blot法检测巨噬细胞中MyD88及磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)的蛋白表达水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果(1)模型组的MyD88(1.196±0.125比0.341±0.063,P<0.01)和p-NF-κB(0.817±0.034比0.312±0.046,P<0.01)蛋白相对表达水平均高于空白对照组;RNAi组的MyD88(0.554±0.043)和p-NF-κB(0.538±0.063)蛋白相对表达水平均低于模型组(P均<0.01),而高于空白对照组(P均<0.05);LIG组MyD88(0.694±0.087)及p-NF-κB(0.669±0.043)蛋白相对表达水平均低于模型组(P<0.05或0.01),而高于RNAi组(P均<0.05)及空白对照组(P均<0.01);RNAi+LIG组的MyD88(0.409±0.069)和p-NF-κB(0.395±0.046)蛋白相对表达水平均低于模型组(P均<0.01)及LIG组(P<0.05或0.01),与空白对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05),p-NF-κB蛋白相对表达水平低于RNAi组(P<0.05)。(2)模型组的TNF-α[(312.24±28.69)ng/L比(5.99±1.03)ng/L,P<0.01]和IL-6[(233.45±57.77)ng/L比(2.25±0.67)ng/L,P<0.01]含量均高于空白对照组;RNAi组的TNF-α[(235.66±25.12)ng/L]和IL-6[(131.59±13.99)ng/L]含量均低于模型组(P均<0.01);LIG组的TNF-α[(258.13±44.80)ng/L]和IL-6[(175.92±28.27)ng/L]含量均低于模型组(P均<0.05),而高于空白对照组(P均<0.01),IL-6含量高于RNAi组(P<0.01);RNAi+LIG组的TNF-α[(88.57±16.10)ng/L]和IL-6[(59.99±10.31)ng/L]含量均低于模型组、RNAi组和LIG组(P<0.05或0.01)。结论 MyD88/NF-κB是人热休克蛋白60诱导THP-1源性巨噬细胞发生炎症反应的信号通路之一,藁本内酯可通过该信号通路发挥抗炎作用。

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