目的探讨miR-15b靶向LPAR3调控食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法取对数生长期的人食管癌Eca109细胞分为对照组、miR-15b mimic组、miR-NC组、miR-15b mimic+pcDNA3.1组、miR-15b mimic+pcDNA-LPAR3组;另设对数期生长的人食管上皮细胞HEEpiC为空白组。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-15b和LPAR3 mRNA的表达;应用MTT法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况;Western blot检测Eca109细胞中LPAR3和增殖、迁移、侵袭相关蛋白(Cyclin D1、MMP-2、MMP-9)的表达。结果与空白组相比,对照组Eca109细胞中miR-15b水平明显降低(1.00±0 vs 0.42±0.03,t=33.486,P<0.01),LPAR3 mRNA水平显著升高(1.00±0 vs 2.33±0.15,t=15.358,P<0.01);与对照组相比,miR-15b mimic组细胞miR-15b水平显著升高(0.42±0.03 vs 4.61±0.38,t=19.039,P<0.01),LPAR3 mRNA(2.33±0.15 vs 1.29±0.13)和蛋白(1.12±0.13 vs 0.35±0.03)水平、细胞增殖率(100.00±0 vs 64.57±6.11)、划痕愈合率(63.45±7.20 vs 36.52±4.29)、Eca109细胞进入Transwell小室下层的数量(155.31±14.23 vs 101.33±11.45)、Cyclin D1(0.85±0.10 vs 0.38±0.05)、MMP-2(0.76±0.08 vs 0.33±0.04)、MMP-9(0.94±0.10 vs 0.41±0.05)蛋白表达均显著降低(t=9.075、9.996、10.044、5.565、5.119、7.281、8.327、8.211,P<0.01);使用pcDNA-LPAR3过表达LPAR3能明显逆转miR-15b mimic对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论食管癌中过表达miR-15b可能通过下调LPAR3表达,抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。
展开▼
