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pcDNA3.0/ATP7B对TX小鼠肝铜代谢影响

         

摘要

目的 探索以重组真核表达质粒pcDNA3.0/ATP7B进行TX小鼠基因治疗的初步疗效.方法 以质粒和脂质体混合后进行尾静脉注射,分别给予TX小鼠pcDNA3.0/APT7B 0、10、20、50、100、150 μg,3d后测定其肝铜含量(ng/mg,即每mg干重的肝组织中铜的含量),确定合适的治疗剂量.然后随机选取36只TX小鼠,随机分成3组,即注射生理盐水组、注射pcDNA3.0组、注射pcDNA3.0/ATP7B组.进行肝脏组织RT PCR、Western blot检测和肝铜含量测定.结果 根据预实验结果,取pcDNA3.0/APT7B 100μg/只为治疗剂量.RT PCR和Western blot结果显示,加入pcDNA3.0/ATP7B组于加入后第3、7、14天均可见阳性条带.但以加入第3天时最明显.加入生理盐水组和加入pcDNA3.0质粒组均未见阳性条带.加入pcDNA3.0/APT7B组与生理盐水组及pcDNA3.0组比较,于加入第3、7天肝铜含量显著下降(P<0.05),以第3天下降最明显.加入第14天肝铜含量无显著下降,P>0.05.结论 ATP7B基因重组真核表达质粒pcDNA3.0/ATP7B对TX小鼠的铜代谢有改善作用.

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