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过表达microRNA-26a大鼠表皮干细胞来源外泌体对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响

         
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目的 探究过表达microRNA-26a(miR-26a)的大鼠表皮干细胞(EPSC)来源外泌体(Exos)对深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合的影响。方法 体外培养大鼠EPSC,用携带miR-26a-绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒颗粒和阴性对照(NC-GFP)转染以上调miR-26a表达,并从未转染的EPSC、NC-GFP转染的EPSC或miR-26a-GFP转染的EPSC中分离Exos,透射电子显微镜(TEM)和纳米粒子追踪分析(NTA)观察Exos形态和大小,蛋白质印迹(Western blot)检测Exos表面标志物CD9、CD63和CD81的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测EPSC及EPSC-Exos中miR-26a表达,CCK-8法检测EPSC的增殖活性;小管形成实验评估miR-26a-EPSC-Exos对血管生成的影响。建立大鼠深Ⅱ度烧伤模型,分为对照组(control组)、NC-EPSC-Exos组和miR-26a-EPSC-Exos组,每组30只。NC-EPSC-Exos组和miR-26a-EPSC-Exos组大鼠给予相应的Exos干预,control组大鼠给予等体积的PBS,每周1次,持续3周。分别在烧伤后第7、14和21天,观察各组大鼠烧伤创面状况,计算创面愈合率;HE染色观察创面组织病理学变化,并进行组织学评分;免疫组织化学法检测创面CD31阳性表达,计算微血管密度(MVD)。结果 miR-26a转染可显著升高EPSC及其Exos中miR-26a表达,促进EPSC细胞增殖(P<0.05);TEM和NTA分析结果显示,Exos呈球形,直径范围在40~150 nm, CD9、CD63和CD81均呈阳性;小管形成实验结果显示,miR-26a-EPSC-Exos可显著增加管长度,促进内皮细胞血管生成(P<0.05)。体内动物实验结果显示,miR-26a-EPSC-Exos可显著加速深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合和修复,增加组织学评分和MVD(P<0.05)。结论 过表达miR-26a的EPSC-Exos可促进深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合。

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