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Tmem72对小鼠神经干细胞体外增殖和分化的影响

         

摘要

目的 探究跨膜蛋白72(transmembrane protein 72,Tmem72)对小鼠神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法 Western blot检测野生小鼠中Tmem72在不同年龄、不同脑区中的蛋白表达情况;在N2a细胞中瞬时转染Tmem72敲降质粒,利用CCK8、RT-qPCR、Western blot检测基因敲降后的增殖变化,流式细胞术检测细胞周期及凋亡变化;在小鼠神经干细胞中用慢病毒感染细胞,RT-qPCR、Western blot检测敲降效率,并检测增殖和分化标记物的表达变化;转录组测序分析差异表达基因及基因富集的信号通路。结果 Tmem72在不同年龄段及脑区中表达;与对照组相比,Tmem72敲降组在N2a细胞与神经干细胞中Tmem72的表达均显著下调(P<0.05);Tmem72敲降后N2a细胞的增殖能力及活力显著上调(P<0.05),而凋亡能力显著下降(P<0.01);Tmem72敲降后神经干细胞的增殖能力无显著变化,但促进向星形胶质细胞和未成熟神经元的方向分化(P<0.05);转录组测序分析发现差异基因富集到跨突触信号条件、胶质细胞分化调节,以及PI3K-Akt、MAPK信号通路、ECM-受体相互作用等方面。结论 Tmem72敲降后对N2a细胞起到促进增殖,抑制凋亡的作用;Tmem72敲降促进神经干细胞向星形胶质细胞和未成熟神经元的方向分化,提示Tmem72与神经发育密切相关。

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