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利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna 基因的初步研究

         
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目的：利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼 lmna 基因的技术方法。方法在斑马鱼 lmna 基因序列中选择靶点，设计针对斑马鱼 lmna 基因的吗啉代寡核苷酸序列（lmna－MO），构建能特异指示 lmna 基因表达的 lmna－EGFP－pCS2＋重组质粒，并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中，通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应 lmna 基因表达量，并通过蛋白质印迹法检测胚胎中 lamin 蛋白表达量。结果蛋白质印迹法检测斑马鱼体内 lamin 蛋白的表达，分别有大小为69 KD 和62 KD 两种蛋白表达。设计并构建了 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋，单独注射 lmna－EGFP－pCS2＋质粒后观察到从6 hpf 到96 hpf 胚胎均有绿色荧光蛋白表达；二者共注射后观察到，与对照组相比，实验组从6 hpf 至30 hpf 胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失；蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内 lamin 蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎 lmna 基因表达。结论可通过 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋共注射方法下调斑马鱼 lmna 基因表达，并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。%Objective Lamins are the major components of nuclear lamina underneath the inner nuclear membrane (INM).Lamins express in most cells and are involved in the whole process of growth, also play a major role in cell stability and embryonic development.Mutant in human LMNA gene may lead to a series of disorders, which are similar to progeria or other aging-associate syndrome.In this study, we report a new lmna knockdown animal model generated in our laboratory in order to provide a useful tool for studying laminopathies.Methods Two plasmids tagged to zebrafish lmna gene were designed based on morpholino oligonucleotides technology.Co-microinjected the plasmids into zebrafish embryos to knockdown lmna gene.Imagining and western blot detection were used to identify the mutants.Results Two different proteins, Lamin A/C, were expressed in the zebrafish embryos.Two plasmids lmna-MO and lmna-EGFP-pCS 2 + were generated and co-microinjected into embryos.The results of imagining and western blot showed that the expression of lmna gene was downregulated in the zebrafish embryos.Conclusions Lamin A/C are expressed in zebrafish.lmna gene can be knocked down by the injection of lmna-MO and lmna-EGFP-pCS 2 +.This new animal model may be a powerful tool for study on laminopathies.

著录项

  • 来源
    《中国比较医学杂志》 |2016年第8期|85-90|共6页
  • 作者

    刘丰; 黄慧敏; 王志华; 吴西军; 何志旭; 舒莉萍;

  • 作者单位

    贵州医科大学免疫学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学免疫学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学附属医院儿科学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学免疫学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学免疫学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学附属医院儿科学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学免疫学教研室;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

    贵州医科大学实验动物中心;

    贵阳;

    贵州 550004;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 实验医学、医学实验;
  • 关键词

    斑马鱼; lmna; 基因下调; 吗啉代寡核苷酸技术;

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