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猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量 PCR方法的建立及初步应用

         
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摘要

Objective To establish a real-time fluorescent quantitative PCR ( Q-PCR) method for detection of feline herpesvirus 1 ( FHV-1 ) in experiment cats and clinical sick cats.Methods Primers and TaqMan probes were designed and synthesized according to the published FHV-1 specific sequences of TK gene.FHV DNA standards were prepared using molecular biological techniques.The linearity, specificity, sensitivity, stability of the established Q-PCR method were tested.The method was used to detect 48 samples of cats.Results The linear range was 102 copies/μL to 109 copies/μL.The developed Q-PCR method showed no cross reaction with herpes virus type 1 ( HSV-1 ) , canine herpesvirus (CHV), pig pseudo rabies virus (PRV) and cat parvovirus (FPV).The sensitivity was 10 copies/μL.The coefficient of variation ( CV ) was less than 5%.There were 33 positive cases detected in the 48 samples of cats. Conclusions The developed Q-PCR method is good in linearity, specificity, sensitivity, stability, and may be used for rapid quantitative detection of FHV-1 in cats.%目的：建立猫疱疹病毒I型（ FHV-1）实时荧光定量PCR检测方法，应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和TaqMan探针，使用分子生物学方法制备质粒标准品，建立FHV-1实时荧光定量PCR方法，并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法；该方法的线性范围为（1×102～1×109）copies／μL，与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（ FPV）均无交叉反应，检测灵敏度可达到10 copies／μL。批内变异系数均小于5％。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点，适合于临床FHV-1的快速定量检测。

著录项

  • 来源
    《中国比较医学杂志》 |2014年第12期|47-54|共8页
  • 作者

    王吉; 卫礼; 付瑞; 李晓波; 王淑菁; 巩薇; 岳秉飞; 贺争鸣;

  • 作者单位

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

    中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心;

    北京 100050;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 人体生理学;
  • 关键词

    猫疱疹病毒Ⅰ型; 实时荧光定量PCR; 猫;

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