重组缩短的葡萄球菌类肠毒素X蛋白克隆表达及催吐活性评价

王铜; 陶晓霞; 孟凡亮; 李心朋; 小野久弥; 王多; 胡东良; 张建中; 王国庆; 闫笑梅

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目的分析缩短的葡萄球菌类肠毒素X（truncated Staphylococcal enterotoxin-like toxin X, tSElX）氨基酸多态性, 对其进行克隆表达纯化并对催吐活性进行评价。方法将tselx序列与本课题组前期完成测序的145株CC398菌株基因组序列及NCBI数据库进行比对分析。设计引物扩增tselx目的基因, 将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序鉴定。经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后将目的片段构建于质粒pGEX-6P-1及pET-28a（+）中, 重组质粒鉴定后, IPTG诱导蛋白表达。将以包涵体形式表达的蛋白进行变性和复性, 用亲和层析法和超滤法对表达产物进行纯化。将纯化的tSElX蛋白以250 μg/kg喂饲普通狨猴, 观察呕吐反应。结果 tselx基因在我国不同来源（患者、健康人群和动物）的145株CC398菌株均存在。我国菌株编码蛋白的氨基酸序列同源性为100.0%, 与4株美国菌株的同源性分别为97.8%（1株）和98.9%（3株）。通过两套表达系统及不同诱导条件, tSElX均以包涵体形式表达。通过变性及复性, 获得高纯度的可溶性重组蛋白tSElX。在250 μg/kg剂量下tSElX蛋白不能引起普通狨猴的呕吐反应。结论 tSElX氨基酸序列在CC398菌株中普遍存在, 且具有一定保守性。高纯度的可溶性tSElX重组蛋白在250 μg/kg剂量下不具有普通狨猴催吐活性。

著录项

来源
《中华流行病学杂志》 |2020年第4期||共页
作者
王铜; 陶晓霞; 孟凡亮; 李心朋; 小野久弥; 王多; 胡东良; 张建中; 王国庆; 闫笑梅;
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作者单位

北华大学医学技术学院;

传染病预防控制国家重点实验室;

感染性疾病诊治协同创新中心;

中国疾病预防控制中心传染病预防控制所;

山东省疾病预防控制中心;

弘前大学大学院医学研究科;

弘前 036-8562;

日本;

北里大学兽医学部;

十和田 034-8628;

日本;

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正文语种 chi
中图分类医药、卫生;
关键词
肠毒素; 重组蛋白; 包涵体; 复性; 催吐活性;

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