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首页> 中文期刊> 《中华实验眼科杂志》 >脉络膜新生血管小鼠微小RNA对骨髓来源细胞表达基质金属蛋白酶的调控作用

脉络膜新生血管小鼠微小RNA对骨髓来源细胞表达基质金属蛋白酶的调控作用

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背景 基质金属蛋白酶-2（MMP-2）/MMP-13在脉络膜新生血管（CNV）生成过程中发挥重要作用,但CNV原位细胞中MMP-2/MMP-13的表达有限.骨髓来源细胞（BMCs）参与CNV生成,可能是CNV中MMP-2/MMP-13的重要来源,而微小RNA188-5p（miR188-5p）可能是调控BMCs表达MMP-2/MMP-13的关键节点. 目的 探讨参与CNV生成的BMCs表达MMP-2/MMP-13的情况及BMCs表达的MMP-2/MMP-13是否受miR188-5p调控.方法 将表达绿色荧光蛋白（GFP）的转基因雌性小鼠的骨髓细胞移植到野生型雌性C57BL/6J小鼠以建立C57BL/6J.GFP嵌合体小鼠模型,流式细胞术检测嵌合度大于85％的42只小鼠纳入实验作为实验组,未进行骨髓细胞移植的野生型雌性C57BL/6J小鼠作为对照组.两组小鼠均以视网膜激光光凝法诱导CNV,两个组分别于光凝前及光凝后第1、3、5、7、10、14、28天各取3只小鼠分离视网膜脉络膜组织,采用ELISA法检测小鼠视网膜脉络膜组织匀浆中MMP-2/MMP-13质量浓度的变化;采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测上述时间点小鼠视网膜脉络膜组织中miR188-5p mRNA的相对表达量变化;采用免疫荧光染色和原位杂交技术观察上述时间点小鼠CNV区GFP阳性细胞中MMP-2/MMP-13和miR188-5p的表达情况,并进行定量分析.结果 实验组C57BL/6J.GFP嵌合体模型小鼠外周血单核细胞中表达GFP细胞所占比例平均为（90.67＆#177;3.02）％,符合实验要求.ELISA检测显示,对照组与实验组小鼠视网膜脉络膜匀浆中MMP-2/MMP-13的表达趋势一致,总体比较差异均无统计学意义（MMP-2：F=0.060,P=0.810;MMP-13：F=0.012,P=0.915）.ELISA和免疫荧光均显示在诱导CNV后1d,实验组和对照组MMP-2表达均快速增加,3d时表达量最高,实验组占总表达量的64.21％,随后两组MMP-2表达均下降.两组MMP-13表达量在诱导CNV后1d缓慢增加,7d时表达量最高,实验组占总表达量的79.61％,随后MMP-13总体表达下降.靶基因预测结果可显示MMP-2和MMP-13的3＆#39;非编码区有miR188-5p的互补结合位点.RT-qPCR和原位杂交检测结果均显示在诱导CNV后1d,视网膜脉络膜中miR188-5p表达量快速下降,7d时表达量最低.小鼠CNV区BMCs中miR188-5p的动态表达与BMCs中MMP-13的动态表达呈负相关（r=-0.868,P＜0.05）;CNV诱导后5d内BMCs中miR188-5p的动态表达与BMCs中MMP-2的动态表达呈负相关（r=-0.997,P＜0.05）. 结论 在激光诱导的小鼠CNV模型中,MMP-2/MMP-13的表达随时间发生动态变化,BMCs对其表达的迅速上调起主要作用.CNV区BMCs中miR188-5p表达随时间变化的趋势与MMP-13相反,与在CNV形成早期MMP-2表达趋势相反.miR188-5p的调控靶基因是MMP-2/MMP-13,提示BMCs的MMP-2/MMP-13表达可能受miR188-5p调控.

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