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首页> 中文期刊> 《中华实验外科杂志》 >人重组真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白-血管内皮生长因子165的体外转染对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

人重组真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白-血管内皮生长因子165的体外转染对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

         
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目的观察人重组真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白2（BMP2）-血管内皮生长因子165（VEGF165）的体外转染对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法以原代分离的兔骨髓间充质干细胞为研究对象,在脂质体的介导下将重组质粒PIRES-BMP2-VEGF165转染至细胞中,采用G418体外筛选稳转细胞株,且在mRNA和蛋白水平上分别检测转染效果。继续培养稳转细胞株,细胞分:空质粒pIRES组、pIRES-BMP2-VEGF165转染组以及成骨诱导剂组;采用Western blot分别检测培养7 d和21 d后各组细胞Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）和骨钙素（OCN）蛋白表达水平;培养14 d后,采用Gomori改良钙钴法染色检测碱性磷酸酶活性;培养21 d后,采用茜素红法钙质染色检测各组细胞钙化结节情况。结果与空质粒pIRES组比较,PIRES-BMP2-VEGF165质粒组细胞在mRNA和蛋白水平上均检测到骨形态发生蛋白2和VEGF165的表达;与空质粒组及成骨诱导剂组比较,重组质粒PIRES-BMP2-VEGF165组细胞ColⅠ和OCN蛋白的表达水平均显著提升（ColⅠ:0.597±0.040比0.230±0.020,P=0.000;0.597±0.040比0.457±0.035,P=0.005;OCN:0.433±0.038比0.083±0.021,P=0.000;0.433±0.038比0.350±0.036,P=0.046）;碱性磷酸酶染色阳性区域占比均显著增加[（69.000±5.568）%比（18.333±3.056）%,P=0.000;（69.000±5.568）%比（43.333±5.508）%,P=0.002],钙化结节阳性区域占比均明显增加[（37.747±3.763）%比（1.587±0.972）%,P=0.000;（37.747±3.763）%比（19.330±4.033）%,P=0.008]。结论人重组真核表达质粒pIRES-BMP2-VEGF165成功转染至兔骨髓间充质干细胞,且与成骨诱导剂比较,重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165对该细胞的成骨分化能力有更明显的促进作用。

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