核纤层蛋白B2通过细胞分裂周期相关蛋白3调控内皮细胞血管新生

徐震亚; 郭铁; 徐娜; 冯敏; 孙荣青

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核纤层蛋白B2通过细胞分裂周期相关蛋白3调控内皮细胞血管新生

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目的探讨核纤层蛋白B2（LMNB2）在血管内皮细胞介导的血管新生中的作用及其调控方式。方法人脐静脉内皮细胞（HUVEC）购自美国典型菌种保藏中心（ATCC）。利用LMNB2的短发夹RNA（shRNA）质粒在HUVEC细胞中下调LMNB2的表达,检测对内皮细胞体外成管的影响,统计单视野管状结构长度及节点数目;通过噻唑蓝（MTT）、细胞计数试剂盒（CCK-8）及划痕实验检测LMNB2对内皮细胞增殖及迁移的影响;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞增殖及迁移相关标志物,包括细胞核增殖抗原（Ki-67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的表达;实时定量PCR（qPCR）检测细胞分裂周期相关蛋白3（CDCA3）的mRNA表达;荧光素酶报告基因实验及CHIP实验检测LMNB2对CDCA3的调控作用。采用Student’st检验进行分析。结果在HUVEC细胞中,下调LMNB2会抑制内皮细胞血管新生,单视野平均管状结构总长由（6.45±0.63） mm下降至（2.61±0.52） mm,下降59.5%（t=4.709,P＆0.01）,节点数量下降由单视野的（14.75±1.25）个下降为（7.75±0.48）个,下降57.5%（t=5.230,P＆0.01）;LMNB2的敲低会抑制内皮细胞的增殖与迁移,伤口愈合率下降25%（t=4.541,P＆0.05）,且Ki-67、PCNA、MMP-2及MMP-9表达均显著降低;在HUVEC细胞中,LMNB2结合CDCA3启动子位点,促进CDCA3的转录。回复实验证实下调LMNB2后过表达CDCA3会回复由LMNB2缺失导致的增殖及血管新生缺陷。结论 LMNB2可调控内皮细胞增殖、迁移,并通过调控CDCA3的表达调控血管新生。

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来源
《中华实验外科杂志》 |2020年第7期||共页
作者
徐震亚; 郭铁; 徐娜; 冯敏; 孙荣青;
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作者单位

郑州大学第一附属医院外科ICU;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类急症、急救处理;
关键词
核纤层蛋白B2; 人脐静脉内皮细胞; 血管新生; 脓毒症; 体外成管; 细胞分裂周期相关蛋白3;

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