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首页> 中文期刊> 《中华实验外科杂志》 >N-myc下游调节基因家族成员3在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用

N-myc下游调节基因家族成员3在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用

         
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目的探讨N-myc下游调节基因家族成员3（NDRG3）对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法实验分NDRG3敲减组和对照组,AGS-NDRG3小发夹状RNA（shRNA）组采用shRNA技术干扰AGS细胞中NDRG3表达,同时设置AGS-Vector对照组转染空白对照病毒;通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测两组细胞中NDRG3 mRNA和蛋白表达以检查AGS-NDRG3 shRNA组中NDRG3敲减效果,利用细胞计数试剂盒（CCK-8）法和Transwell实验分别检测两组细胞中细胞增殖和侵袭能力,利用流式细胞仪分析两组细胞中细胞周期分布情况,并通过Western blot检测敲减两组细胞中细胞核增殖抗原（Ki-67）和p53蛋白表达水平,组间比较采用单因素方差分析。结果 AGS-NDRG3 shRNA组NDRG3 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组（NDRG3 mRNA,0.220±0.035比1.020±0.078,t=14.713,P＆0.01;NDRG3蛋白,0.140±0.018比0.820±0.025,t=7.892,P＆0.01）,差异均有统计学意义。CCK-8实验结果显示,在培养24、48、72 h后,AGS-NDRG3 shRNA组细胞的增殖水平（0.388±0.025、0.576±0.044、0.873±0.051）明显低于对照组（0.457±0.033、0.674±0.047、1.125±0.062）,差异均有统计学意义（t=4.983、5.852、8.082,P＆0.01）;Transwell迁移实验结果表明,AGS-NDRG3 shRNA组侵袭穿过Transwell小室膜的细胞数[（474.5±27.6）个]明显低于对照组[（1 127.0±48.8）个],差异有统计学意义（t=12.380,P＆0.01）;细胞周期分析显示,敲减NDRG3表达的AGS细胞周期阻滞于S期,其S期占49.33%,对照组S期占30.29%（t=4.634,P＆0.01）,差异均有统计学意义;Western blot检测结果显示,敲减NDRG3表达后AGS细胞中Ki-67蛋白表达低于对照组（0.380±0.021比0.860±0.036,t=5.163,P＆0.01）、野生型p53蛋白表达高于对照组（0.720±0.018比0.160±0.013,t=11.354,P＆0.01）,差异均有统计学意义。结论 NDRG3可能通过调控p53通路促进AGS细胞增殖及侵袭能力。

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