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miR-16通过靶向调控YAP1基因表达影响肺癌细胞的增殖

         

摘要

目的 探讨miR-16通过靶向调控Yes相关蛋白(YAP)1基因表达影响肺癌细胞的增殖.方法 采用RT-PCR法检测miR-16在不同肺癌细胞株及人正常胚肺细胞中的表达.脂质体LipofectamineTM3000将miR-16 mimics和miR-16 NC转入肺癌细胞中,RT-PCR检测miR-16表达,MTT法检测细胞活力,软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆数目,Ho-echst33258检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western印迹检测细胞中YAP1蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析.结果 miR-16在A549、H1050、H1299、NCI-H520、NCI H596及MIRC-5中的表达分别为(0.38±0.03)、(1.35±0.01)、(1.10±0.11)、(1.43±0.14)、(1.56±0.15)、(2.38±0.25);与MIRC-5比较,肺癌细胞中miR-16表达量下调(P<0.01),且在A549细胞中表达量最低,因此选为后续实验研究对象.与miR-16 NC组比较,miR-16 mimics组miR-16表达量显著提高(P<0.01);且转染24、48、72 h后,细胞活力均下降(P<0.01);转染48 h后,细胞克隆形成数目减少(P<0.01),细胞凋亡率提高(P<0.01),细胞周期阻滞于G1期(P<0.01);同时,miR-16 mimics能够靶向调控YAP1,下调YAP1蛋白及mRNA表达(P<0.01).结论 miR-16 mimics通过靶向下调YAP1表达进而抑制A549细胞增殖.

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