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miR-23b通过MAPK信号通路对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

         
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目的 研究microRNA(miR)-23b对H2O2诱导的人血管内皮细胞(HUVECs)损伤中的保护作用及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用.方法 体外培养HUVECs,利用细胞转染法对HUVECs转染miR-23b mimic,同时转染miR-23b mimic阳性对照作为对照,分别对转染的细胞用100μmol/L H2 O2诱导造成HUVECs氧化应激损伤,qRT-PCR法检测细胞中miR-23b水平,流式细胞术检测HUVECs凋亡情况,Western印迹检测细胞中MAPKs信号通路中p38-MAPK、磷酸化(p-)p38-MAPK(p-p38)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,并测定细胞中丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性.用MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理上调miR-23b的H2 O2诱导的HUVECs,同样的方法检测细胞中p38-MAPK、p-p38、Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及细胞中MDA、SOD、LDH活性.结果 转染miR-23b-mimic后细胞中miR-23b的表达水平明显升高,与对照组差异具有统计学意义(P<0.05).转染后经H2O2处理的HUVECs miR-23b水平显著升高,细胞凋亡率明显降低,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平降低,细胞中p38-MAPK、p-p38的表达下调,SOD活性降低,MDA含量增加,LDH活性升高,与转染对照经H2 O2处理的HUVECs相比,差异具有统计学意义(P<0.05).MAPK信号通路激活剂茴香霉素处理后,HUVECs中p38-MAPK和p-p38表达升高,SOD活性升高,MDA含量减少,LDH活性降低,与上调miR-23b的H2O2诱导的HUVECs相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 上调miR-23b可减少H2 O2诱导的HUVECs凋亡,减少对细胞的损伤,对H2 O2诱导的HUVECs起到保护作用,其作用机制与抑制MAPK信号通路的激活有关.

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