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首页> 中文期刊> 《中华肝胆外科杂志》 >小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

         
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目的构建小鼠SCP2基因shRNA重组腺病毒载体,进一步研究SCP2基因与胆囊胆固醇结石形成机制。方法 （1）两步PCR法合成针对小鼠SCP2基因shRNA,并连接到质粒PDC312上;（2）采用AdMax TM Adenoviru5 Vector系统包装病毒,CsCl法纯化病毒、TCID50法测定滴度;（3）western印迹检测SCP2蛋白验证重组腺病毒沉默效果,RT-PCR检测重组腺病毒在小鼠hepa1～6细胞中SCP2、HMGCR、CYP7A1基因mRNA的表达。结果 （1）腺病毒载体AdshlRNA和Adsh2RNA对sCP2均有抑制作用,在SCP2raRNA水平,与AdsshRNA组比较,AdshlRNA tD1=9.056,P＜0.05,Adsh2RNA tD2=7.777,P＜0.05,差异均有统计学意义,蛋白水平与mRNA一致;（2）scP2基因低表达时,CYP7A1 mRNA表达升高,t=10.68,P＜0.05,HMGCR mRNA表达下降,t=10.10,P＜0.05,差异有统计学意义。结论成功构建小鼠SCP2基因的shRNA重组腺病毒载体。SCP2低表达时可能影响HMGCoA还原酶和CYP7-α1羟化酶的活性,导致胆固醇代谢的变化,从而减少胆固醇结石的形成。

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