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E7多肽的抗原表位特性与多肽反应阳性结核患者的HLA-DR等位基因分析

         
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摘要

目的:分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)E7多肽的T细胞抗原表位特性,克隆及分析E7多肽反应阳性的结核患者HLA-DR等位基因.方法:应用从结核患者末梢血分离的单个核细胞(PBMC),以IFN-γ-ELISPOT和细胞内细胞因子染色分析MTB E7多肽的T细胞抗原表位特性;从E7-ELISPOT阳性反应的PBMC或胸水细胞中扩增、克隆和分析HLA-DR α和β链等位基因.结果:311例患者IFN-γ-E7-ELISPOT检测显示233例阳性(阳性率75%),阳性结果的平均SFC为210个斑点/106细胞,E7和另一多肽(E6多肽)混合检测529例患者则显示492例阳性(阳性率93%),平均SFC为572个斑点/106细胞;E7多肽刺激后,19例患者的PBMC经细胞内细胞因子染色结果显示能产生IFN-γ的CD4+ T细胞百分率为0.63±1.30,而5例健康对照者为0.05±0.056,两者有显著性差异(P＜0.004);扩增、克隆出了共有的HLA-DRA*0101和15种HLA-DRB1等位基因.结论:E7是一种理想的广谱HLA-DR限制性CD4+ T细胞反应性多肽,为深入研究结核患者的HLA-DRB等位基因的分布特点以及制备相应四聚体建立了基础.%Objective: To study T cell epitope characteristics of peptide E7 from Mycobacterium tuberculosis (MTB), to clone and analyze HLA-DR alleles of the E7-positive patients with tuberculosis (TB).Methods: The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from TB patients were tested by IFN-γ-ELISPOT and intracellular cytokine staining to study T cell epitope characteristics of peptide E7.HLA-DR alleles from PBMC or inflammatory cells in pleural fluid (PLF) of E7/ELISPOT-positive TB patients were cloned and analyzed by a PCR-based recombination technique.Results: 233 of 311 and 492 of 529 patients samples ( with positive rate 75 ％ and 93 ％ ) appeared positive and mean positive SFC was 210 and 572 dots/106 PBMCs by IFN-γ-E7-ELISPOT and IFN-γ-E7 + E6 mix-ELISPOT, respectively.The intracellular cytokine staining detections showed that the percentage of CD4+ T cells producing IFN-γ after E7 stimulation in 19 TB patients samples was 0.63 ± 1.30, compared to 0.05 ± 0.056 in 5 healthy control samples ( P ＜ 0.004).By amplifying, cloning and sequencing, at least 15 different HLADRB alleles and HLA-DRA1 * 0101 were found in these E7/ELISPOT-positive patients identified.Conclusion:Peptide E7 is an ideal CD4+ T cell-responsive and novel HLA-DR-restricted epitope.Obtained HLA-DRB alleles lay a foundation for the further research of distribution of HLA-DRB alleles in TB patients and preparation of E7/HLA-DR tetramers.

著录项

  • 来源
    《中国免疫学杂志》 |2011年第2期|163-166171|共5页
  • 作者

    方毅敏; 马志明; 赖小敏; 任亮亮; 李研; 冯永忠; 彭毅; 董涛; 詹能勇; 黄宇虹; 程俊;

  • 作者单位

    广州市胸科医院,广州,510095;

    广州市胸科医院,广州,510095;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    广州市胸科医院,广州,510095;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    深圳市第三人民医院,深圳518020;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

    中山大学中山医学院微生物学教研室、热带病防治研究教育部重点实验室、广东省重大传染病预防和控制技术研究中心,广州,510080;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 免疫分子生物学（免疫化学）;分枝杆菌属（抗酸性杆菌）;肺结核;
  • 关键词

    结核; E7多肽; HLA-DR;

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