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首页> 中文期刊> 《中华传染病杂志》 >神经前体细胞表达发育调控样基因4在乙型肝炎病毒复制中的作用

神经前体细胞表达发育调控样基因4在乙型肝炎病毒复制中的作用

         
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目的研究神经前体细胞表达发育调控样基因4（neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated gene 4-like,NEDD4L）对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）复制的影响及其可能的分子机制。方法采用Lipofectamine2000分别将靶向NEDD4L的小干扰RNA、NEDD4L的过表达质粒（pcDNA3.1-NEDD4L-HA）、HBV复制质粒（pGEM-HBV1.3）和poly（dAT:dAT）瞬时转染至HepG2细胞,并以可稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NEDD4L、α干扰素、β干扰素、干扰素刺激基因56（interferon-stimulated gene 56,ISG56）、黏液病毒抗性蛋白A（myxovirus resistance protein A,MxA）、寡腺苷酸合成酶（oligoadenylate synthetase,OAS）等的mRNA水平,以及HBV DNA和3.5 kb HBV RNA的表达水平;采用蛋白质印迹法验证NEDD4L沉默或过表达效果,并检测相关信号分子的蛋白质水平;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中β干扰素产量。统计学方法采用t检验。结果 HepG2.2.15细胞中的NEDD4L mRNA和蛋白质水平分别为10.53±0.47和4.17±0.43,分别高于HepG2细胞中的1.00±0.05和1.26±0.25,差异均有统计学意义（t=3.27,P=0.008;t=1.68,P=0.030）。在敲减NEDD4L基因表达的细胞中,上清液HBV DNA表达水平为0.32±0.09,低于对照组的1.00±0.05,差异有统计学意义（t=-0.93,P=0.020）;3.5 kb HBV RNA表达水平为0.49±0.11,低于对照组的1.00±0.05,差异有统计学意义（t=-0.68,P=0.040）。与对照组相比,NEDD4L敲减组的β干扰素、ISG56、MxA和OAS的mRNA相对表达水平均上升,差异均有统计学意义（t=4.66、9.38、7.29、7.01,均P＆0.01）。NEDD4L敲减组β干扰素含量在poly（dAT:dAT）处理和水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus,VSV）刺激时分别为（776.41±115.49） ng/L和（961.21±130.19） ng/L,分别高于对照组的（320.15±56.05） ng/L和（440.17±67.82） ng/L,差异均有统计学意义（t=2.43,P=0.020;t=2.85,P=0.030）;NEDD4L过表达组β干扰素含量在poly（dAT:dAT）处理和VSV刺激时分别为（156.18±26.47） ng/L和（176.67±34.51） ng/L,分别低于对照组的（320.38±49.39） ng/L和（440.59±68.83） ng/L,差异均有统计学意义（t=-2.03,P=0.040;t=-1.93,P=0.030）。HBV复制下调了β干扰素上游黑色素瘤分化相关蛋白5（melanoma differentiation-associated protein 5,MDA5）的蛋白质水平,而该下调作用在敲减NEDD4L的细胞中并不明显。结论 HBV复制能通过促进细胞NEDD4L的表达,下调MDA5而抑制β干扰素的产生,进而辅助HBV的固有免疫逃逸。

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