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基于Wnt/β-catenin信号通路的复方补肾活血颗粒对骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化的影响

         

摘要

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨复方补肾活血颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨、成脂分化的影响。方法取骨质疏松症患者骨髓,体外培养BMSCs,将细胞分为空白组和含药血清低、中、高剂量组(2%、5%、8%),CCK-8法检测细胞活力,碱性磷酸酶染色、茜素红染色观察成骨分化潜能,油红O染色观察成脂分化潜能,RT-PCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(RUNX2)、Osterix(Osx)和成脂分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γmRNA表达,Western blot检测RUNX2、Osx、C/EBPα、PPARγ、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)5及β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果与空白组比较,含药血清各剂量组细胞活力显著升高,其中以含药血清中剂量组效果最佳;含药血清各剂量组可促进BMSCs早期钙化和钙沉积形成,抑制脂滴形成;含药血清各剂量组BMSCsRUNX2、OsxmRNA和蛋白表达升高,C/EBPα、PPARγmRNA和蛋白表达降低,LRP5和β-catenin蛋白表达明显升高,其中含药血清高剂量组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论复方补肾活血颗粒含药血清对BMSCs成骨分化相关因子表达有明显促进作用,并可抑制BMSCs成脂分化,其机制与激活Wnt/β-catenin信号通路,进而调节成骨-成脂平衡有关。

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