新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用

夏乾峰; 文阳安; 刘靳波; 李朴; 涂植光

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目的开发新型二聚体突变荧光引物技术,建立一种能广泛应用于临床检测HCV的实时PCR方法。方法构建重组质粒pMD18-T-HCV 5′NCR作为标准品,设计二聚体突变荧光引物,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测,定量结果与商品化TaqMan HCV定量试剂盒的定量结果进行比较。结果建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法,检测的线性范围为20～10~9IU/ml;批内CV在1.37%～4.59%之间,批间CV在1.58%～4.81%之间;对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性,检测特异性为100%（60/60）;对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性,定量结果与商品化TaqMan HCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数R~2=0.9501。结论建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法,具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点,可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持。

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来源
《中华检验医学杂志》 |2011年第8期||共页
作者
夏乾峰; 文阳安; 刘靳波; 李朴; 涂植光;
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作者单位

1. 重庆医科大学医学检验系教育部临床检验诊断学重点实验室 2. 海南医学院热带医学与检验医学院;

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正文语种 chi
中图分类 R450;
关键词
肝炎病毒属; 聚合酶链反应; RNA; 病毒;

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