基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体—细胞偶联物构建

王明婧; 范晨晨; 王倩; 蒋昊

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基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体—细胞偶联物构建

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目的通过基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的糖链工程将曲妥珠单抗高密度偶联到人外周血白血病T细胞Jurkat细胞,并评价偶联细胞对HER2+靶细胞的识别活性。方法首先通过凝集素染色和流式细胞术探究去唾液酸化对细胞上α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑效率的影响。然后制备含有叠氮标签的曲妥珠单抗,与GDP-炔基岩藻糖通过生物正交反应构建GDP-岩藻糖-抗体偶联物。再利用α-1,3FucT将GDP-岩藻糖-抗体偶联物转移至唾液酸酶处理过的细胞表面,构建抗体-细胞偶联物,并通过流式细胞术和共聚焦成像验证。最后通过荧光成像观察抗体-细胞偶联物对靶细胞SK-BR-3细胞的识别。结果细胞表面糖链的末端α-2,6唾液酸切除后能够显著提升α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑的效率,成功制备GDP-岩藻糖-抗体偶联物并转移至细胞表面得到曲妥珠单抗-Jurkat偶联物,去唾液酸化显著增加了Jurkat细胞偶联曲妥珠单抗的容量,构建的曲妥珠单抗-Jurkat偶联物具备HER2+细胞靶向性。结论细胞糖链工程可实现细胞偶联分子容量的调节,应用于抗体对免疫细胞的功能化,也为构建海洋糖类活性化合物偶联细胞提供了新的思路。

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来源
《中国海洋药物》 |2023年第1期|49-56|共8页
作者
王明婧; 范晨晨; 王倩; 蒋昊;
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作者单位

中国海洋大学、山东省糖科学与糖工程重点实验室;

医药学院;

山东青岛266003;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类药物生物学;
关键词
曲妥珠单抗; 岩藻糖基化; Jurkat细胞; 唾液酸; 生物正交反应;

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