白念珠菌HSP90与人源HSP90的克隆表达及其C端的比较分析

孟靖顺; 吴建华; 赵静; 王玉莲; 薛伟

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白念珠菌HSP90与人源HSP90的克隆表达及其C端的比较分析

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目的分别体外表达纯化白念珠菌HSP90 (CaHSP90)和人源HSP90 (hHSP90)并分析C-端序列差异对其体外状态下分子聚合度的影响.方法我们将CaHSP90、hHSP90野生型及其C-端酶切碱基序列通过PCR进行扩增并通过NdeI/XhoI酶切位点连接到到pET22b+质粒中.将构建好的上述质粒转入大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行表达并通过Ni2+-NTA柱以及Superdex-200快速柱层析系统(FPLC)纯化.所得蛋白通过SDS-PAGE以及分子排阻色谱(SEC)测定分子量和聚合状态.结果通过测序鉴定所有质粒构建成功,并最终纯化得到足够纯度的蛋白进行SEC分析实验.分析结果表明野生型CaHSP90和hHSP90在体外具有相似的聚合度,而C-端突变后则存在明显差异.结论 CaHSP90和hHSP90的C-端结构域对其体外聚合状态有着不同的影响,CaHSP90的C-端结构域有可能成为CaHSP90抑制剂一个潜在靶点.

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来源
《中国真菌学杂志》 |2016年第6期|321-326|共6页
作者
孟靖顺; 吴建华; 赵静; 王玉莲; 薛伟;
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作者单位

上海长海医院,上海200433;

上海长海医院,上海200433;

上海长海医院,上海200433;

上海长海医院,上海200433;

中国科学院大学,上海200031;

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正文语种 chi
中图分类念珠菌;
关键词
白念珠菌; HSP90; 蛋白结构; 蛋白表达与纯化;

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