目的:观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对肾小球内皮细胞通透性的影响,并与脐静脉内皮细胞进行比较分析. 方法:采用二室弥散系统检测内皮细胞通透性.肾小球内皮细胞(MGEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)接种于细胞培养嵌套的微孔滤膜(孔径0.45 μm)上,待细胞生长融合后,加入不同浓度的VEGF作为处理因素,以生物素标记的牛血清白蛋白(biotin-BSA)作为通透性指示剂,采用ELISA方法检测不同时间段biotin-BSA通过细胞单层的百分数. 结果:正常培养条件下,生长在滤膜上的MGEC和HUVEC单层的通透性没有明显差异.VEGF可显著增加MGEC和HUVEC的通透性,呈剂量和时间依赖性.1 μg/L VEGF作用12 h可使MGEC对白蛋白的通透率增加近25%(0.31±0.03 vs 0.25±0.03);VEGF浓度达10 μg/L始显著增加HUVEC通透性(0.28±0.07 vs 0.21±0.04),且远小于MGEC通透性增加的幅度(P＜0.01);VEGF浓度达50 μg/L时,其增加内皮细胞通透性的作用基本达到饱和.50 μg/L VEGF作用0.5 h即可使MGEC和HUVEC的蛋白通透率分别增加100%(0.12±0.02 vs 0.06±0.01)和60%(0.08±0.03 vs 0.05±0.01),并至少持续到12 h. 结论:首次在体外直接证实了VEGF具有增加MGEC通透性的功能,并发现MGEC对VEGF的反应性高于HUVEC,表明不同部位和不同结构的内皮细胞对VEGF的反应性存在着差异.MGEC对VEGF的高敏感性,提示VEGF在肾脏疾病及蛋白尿发生中起着重要的作用.
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