慢病毒介导磷酸二酯酶5基因修饰对大鼠脂肪干细胞效能的影响

黄昭; 陈裕胜; 吴晓琴; 刘继云

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目的探讨慢病毒介导的磷酸二酯酶5（PDE5）基因抑制对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）增殖、凋亡及分泌功能的影响及其可能机制。方法（1）分离纯化大鼠ADSCs,传代培养及鉴定。构建沉默PDE5基因不同位点的3组PDE5慢病毒表达载体（PDE5 shRNA1、PDE5 shRNA2、PDE5shRNA3）并设置阴性对照（NC shRNA）,采用慢病毒包装系统稳定转染ADSCs,应用RT-PCR检测ADSCs PDE5 mRNA表达,应用Western blotting检测ADSCsPDE5蛋白表达,以筛选出最高效的转染细胞株。（2）实验分为4组:正常细胞组、缺血-复氧（I/R）损伤细胞组（正常细胞+I/R损伤）、阴性对照组（NC shRNA-ADSCs+I/R损伤）、PDE5 shRNA-ADSCs+I/R损伤组（PDE5 sh I/R组）。采用CCK-8法及Edu法检测各组细胞24 h、48 h增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用ELISA法检测上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（FGF）及细胞内环磷鸟苷（cGMP）水平。结果成功构建了PDE5慢病毒表达载体,筛选并成功建立了稳定低表达PDE5基因的ADSCs细胞株PDE5 shRNA-ADSCs。与正常细胞组相比,I/R损伤细胞组ADSCs增殖率明显降低,早期、晚期及总凋亡率均明显增加,上清液中VEGF、FGF水平及细胞内cGMP水平明显增高,差异均有统计学意义（P＜0.05）;阴性对照组与I/R损伤细胞组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;而与阴性对照组相比,PDE5 sh I/R组ADSCs增殖显著增加,凋亡率明显下降,且上清液中VEGF、FGF水平及细胞内cGMP水平进一步升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 PDE5基因表达被抑制后可能通过上调cGMP水平,有效改善ADSCs在I/R状态下的增殖、凋亡及分泌功能,优化其效能。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2015年第11期||共页
作者
黄昭; 陈裕胜; 吴晓琴; 刘继云;
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作者单位

广州市第一人民医院危重症监护中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类神经病学;
关键词
脂肪干细胞; 磷酸二酯酶5; 缺血-复氧损伤; 细胞增殖; 细胞凋亡;

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