mir-7-3基因慢病毒表达载体的构建及对人胶质瘤细胞生长抑制作用的研究

董伦; 李健; 武永康; 宿建辉; 张恒柱; 韩崇旭

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目的构建mir-7-3基因慢病毒表达载体,研究mir-7-3基因的功能及其在胶质瘤基因治疗中的应用。方法将Lenti—GFP-mir-7-3质粒和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G共同转染至人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带mir-7-3基因和绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组慢病毒FIV-CMV-GFP-mir-7-3,荧光显微镜下观察293T细胞的荧光表达:取浓缩纯化后的病毒上清感染人胶质瘤细胞U251作为转染组,同时设转染空载病毒的阴性对照组和空白对照组,RT-PCR鉴定U251细胞中mir-7-3基因的表达水平。Western blotting检测转染后48 h细胞表皮生长因子受体（EGFR）及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT2）蛋白的表达。MTT法检测转染后1~6 d细胞存活率的变化。流式细胞术检测转染后48 h细胞周期的变化。结果 Lenti-GFP-mir-7-3共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒FIV-CMV-GFP-mir-7-3,荧光显微镜下能直接观察到GFP,FIV-CMV-GFP-mir-7-3中携有正确的mir-7-3基因,目的基因mir-7-3能被重组慢病毒高效地导入U251。与空白对照组和阴性对照组比较,转染后48 h转染组细胞EGFR及AKT2蛋白的表达下降（AKT2表达下调42%,EGFR表达下调38%）。G0/G1期细胞增加,S期细胞数目下降,转染3、4、5、6 d后转染组细胞存活率降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论成功构建了携带mir-7-3基因的重组慢病毒载体;mir-7-3有效地抑制EGFR通路表达,抑制细胞周期G1期向S期转化,抑制胶质瘤增殖,因此mir-7-3有可能成为胶质瘤基因治疗的候选药物。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2014年第1期||共页
作者
董伦; 李健; 武永康; 宿建辉; 张恒柱; 韩崇旭;
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作者单位

1. 扬州大学临床医学院神经外科 2. 扬州大学临床医学院医务科 3. 扬州大学临床医学院中心实验室;

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正文语种 chi
中图分类颅内肿瘤及脑肿瘤;
关键词
mir-7-3; 慢病毒; 表皮生长因子; 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2; 神经胶质瘤; 增殖;

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