重组腺病毒载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF的构建和鉴定

赵国庆; 肖哲; 袁军; 韩天旺

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重组腺病毒载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF的构建和鉴定

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目的构建携带绿色荧光蛋白（GFP）标记的小鼠β-NGF重组腺病毒载体。方法利用RT-PCR法从小鼠颌下腺总mRNA中扩增β-NGF全长cDNA片断,定向克隆于腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV（已标记绿色荧光蛋白）中;在细菌中与缺陷型腺病毒基因组pAdeasy-1进行同源重组,构建Adeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF载体,并进行酶切鉴定。结果成功获得小鼠β-NGF全长扩增片段;pAdTrack-CMV-β-NGF测序验证含有目的基因;双酶切鉴定成功构建重组pAdTrack-CMV-β-NGF质粒;限制性内切酶的酶切分析结果证明成功构建同源重组的Adeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF载体。结论本实验所用方法可高效、安全构建腺病毒载体pAdeasy-1/pAdtrack-CMV-GFP-β-NGF。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2011年第9期||共页
作者
赵国庆; 肖哲; 袁军; 韩天旺;
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作者单位

汕头大学医学院第一附属医院神经外科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类医药、卫生;
关键词
神经生长因子; 腺病毒载体; 绿色荧光蛋白; 基因治疗;

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