大鼠脂肪基质细胞的分离培养及二步法诱导分化神经细胞

唐艳平; 张洪钿; 邹雨汐; 姜晓丹; 肖中举

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目的研究脂肪基质细胞体外培养扩增及向神经细胞诱导分化的新方法。方法取SD大鼠的腹膜后脂肪组织,以Ⅰ型胶原酶消化离心,含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基重悬细胞,增殖传代,取第5代细胞进行二步法诱导分化。首先以无血清Neurobasal培养基联合应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）20 ng/mL、表皮生长因子（EGF）20ng/mL和N2（1:100）添加剂将细胞先诱导成神经球;再取第二代神经球加入1%胎牛血清、5%马血清、0.5 μmol/L的维甲酸（RA）和50ng/mL脑源性神经营养因子（BDNF）,促进其向神经元和胶质细胞方向分化;免疫荧光染色鉴定细胞分化结果。结果初接种的细胞大多呈网球状,悬浮在培养基中,24h后贴壁。随着细胞密度加大,形态变成单层成纤维样细胞,呈漩涡状排列。无血清Neurobasal培养基诱导5～7 d可见悬浮的神经球出现;神经球迅速增殖,14 d时直径可达100 μm。分化后的大部分细胞呈现典型的神经元样改变,细胞体为圆形,内可见明显的细胞核,细胞伸出细长突起或网状突起,可见较多的细胞形成网络连接。免疫荧光染色鉴定结果证实,除了神经球可以高表达巢蛋白（nestin）（阳性率75.62%±1.34%）之外,分化细胞还可有效表达β-tubulinⅢ（未成熟神经元标记物,阳性率达57.62%±4.92%）或微管相关蛋白2（MAP2ab）（成熟神经元标记物,阳性率11.25%±3.87%）;有少量细胞表达胶质纤维酸性蛋白（GFAP）（阳性率18.34%±3.87%）和GalC（阳性率14.35%±3.98%）。结论从成年大鼠脂肪中分离得到的脂肪基质细胞可在体外培养得到大量分化潜能稳定的子代细胞。应用本实验二步诱导法,可得到较高比例的nestin及β-tubulinⅢ阳性细胞,并有一定比例MAP2ab阳性细胞出现。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2009年第4期||共页
作者
唐艳平; 张洪钿; 邹雨汐; 姜晓丹; 肖中举;
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作者单位

1. 广东神经外科研究所南方医科大学珠江医院神经外科广东省脑功能修复与再生重点实验室 2. 南方医科大学基础部生理学教研室;

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正文语种 chi
中图分类筋腱、韧带、滑囊疾病及损伤;
关键词
脂肪基质细胞; 诱导; 细胞分化; 神经元样细胞;

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