绿色荧光蛋白基因腺病毒载体转染人骨髓间充质干细胞的实验研究

许刚; 徐如祥; 姜晓丹; 周德祥; 姚鹏飞; 秦昆; 蔡颖谦; 邹雨汐; 秦玲莎

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目的研究绿色荧光蛋白基因（Ad-GFP）腺病毒载体在人骨髓间充质干细胞（BMSCs）转染和表达的量效关系及对细胞生物学特性的影响,探讨用该载体构建基因修饰BMSCs的可行性。方法在体外分离培养人BMSCs,流式细胞仪检测细胞免疫表型,293细胞包装制备病毒,以不同滴度的Ad-GFP(1×10~3～1×1010PFU/mL)转染BMSCs,细胞计数法分析转染率,倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK8法检测细胞增殖活性,用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导转染Ad-GFP的BMSCs向神经元样细胞定向分化。结果3～6代BMSCs表面标志CD34、CD45呈阴性而CD29、CD44呈阳性;当病毒滴度为1×10~7 PFU/mL时转染率为55%,1×10~9及1×1010PFU/mL滴度时转染率均为85%,但1×1010PFU/mL滴度时出现细胞病理现象;7 d荧光表达最强,28 d仍可见荧光表达。荧光显微镜下可见表达Ad-GFP的BMSCs有三种亚群结构;滴度≥1×10~6 PFU/mL时,BMSCs增殖在早期受到抑制,且呈剂量依赖;转染Ad-GFP的BMSCs经β-巯基乙醇诱导可分化为神经元样细胞,神经元特异性烯醇化酶（NSE）阳性。结论合适滴度的Ad-GFP可以高效转染BMSCs,对细胞的生物学特性影响较小,不影响诱导分化功能,BMSCs可以作为用Ad-GFP载体系统进行基因治疗研究的种子细胞。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2007年第11期|1093-1096|共4页
作者
许刚; 徐如祥; 姜晓丹; 周德祥; 姚鹏飞; 秦昆; 蔡颖谦; 邹雨汐; 秦玲莎;
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作者单位

南方医科大学珠江医院神经外科;

广东神经外科研究所;

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正文语种 chi
中图分类人体组织学;
关键词
骨髓间充质干细胞; 绿色荧光蛋白; 腺病毒载体; 细胞分化;

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