重组质粒pEGFP-mDlx5的构建及其在SVZa神经干细胞中的表达研究

高方友; 杨辉; 张治元; 何家全; 刘仕勇; 邱克军

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目的构建真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5,并了解它在室管膜前下区（SVZa）神经干细胞（NSCs）中的mRNA及融合蛋白表达情况。方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将小鼠来源的mDlx5基因克隆到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）载体上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用电穿孔的方法转染SVZa NSCs,荧光显微镜下动态观察荧光变化情况;培养24h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白,通过逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）了解其mRNA表达情况,用Western blot 检测其蛋白表达情况。结果重组质粒通过双酶切产生了0．78 kb目的插入片段及4．68 kb载体片段;测序后证实0．78 kb片段碱基序列与mDlx5基因完全同源;重组质粒转染SVZa NSCs 8 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,12 h后逐渐增多,24-48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过 RT-PCR检测到mRNA表达,Western blot检测到58 kD目的蛋白表达。结论新构建的真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5通过鉴定,结构正确:转染到SVZa NSCs后能在其中表达、发挥功能,为后续研究奠定了基础。

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来源
《中华神经医学杂志》 |2006年第5期|450-453|共4页
作者
高方友; 杨辉; 张治元; 何家全; 刘仕勇; 邱克军;
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作者单位

中国人民解放军第三军医大学新桥医院神经外科;

中国人民解放军第三军医大学新桥医院神经外科;

中国人民解放军第三军医大学新桥医院神经外科;

中国人民解放军第三军医大学新桥医院神经外科;

中国人民解放军第三军医大学新桥医院神经外科;

中国人民解放军第三军医大学新桥医院神经外科 400037 重庆;

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正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
重组质粒; 绿色荧光蛋白; Dlx5基因; 室管膜前下区; 神经干细胞;

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