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BDNF通过Akt信号通路减轻罗哌卡因诱导的神经细胞损伤

         
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目的 探讨脑源性神经营养因子（BDNF）对罗哌卡因诱导的神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法 （1）实验一：分别用0、1、2、3、4、5 mmol/L罗哌卡因刺激人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 48 h,于显微镜下观察各组细胞的形态变化,采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的活性情况,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,采用免疫组化染色检测各组细胞中蛋白激酶B（Akt）、增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞的表达。（2）实验二：分别用0、1、3、5、7 mmol/L罗哌卡因刺激SH-SY5Y细胞48 h,采用MTT法检测各组细胞的活性情况并计算出罗哌卡因的半抑制浓度（IC50）。将SH-SY5Y细胞分为对照组（磷酸盐缓冲液刺激48 h）、罗哌卡因组（IC50浓度罗哌卡因刺激48 h）、BDNF+罗哌卡因组（20 μg/L BDNF刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h）、Akt信号通路激活剂SC79+罗哌卡因组（5 mg/L SC79刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h）、BDNF+Akt信号通路抑制剂API-2+罗哌卡因组（20 μg/L BDNF及10 μmol/L API-2刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h）,于显微镜下观察各组细胞的形态变化,采用MTT法检测各组细胞的活性情况,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,采用免疫组化染色检测各组细胞中Akt、PCNA阳性细胞的表达,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blotting检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3） mRNA及蛋白的表达,采用Western blotting检测各组细胞中Akt、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）蛋白的表达。结果 （1）实验一：与0 mmol/L罗哌卡因组比较,1、2、3、4、5 mmol/L罗哌卡因组的细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Akt、PCNA阳性细胞数明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（2）实验二：与对照组比较,罗哌卡因组的细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Akt、PCNA阳性细胞数明显降低,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达均明显升高,p-Akt、p-PI3K蛋白的表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。与罗哌卡因组比较,BDNF+罗哌卡因组、SC79+罗哌卡因组的细胞活性明显升高,细胞凋亡率明显降低,Akt、PCNA阳性细胞数明显升高,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达明显降低,p-Akt、p-PI3K蛋白的表达明显升高,差异均有统计学意义（P＆0.05）。与BDNF+罗哌卡因组、SC79+罗哌卡因组比较,BDNF+API-2+罗哌卡因组的细胞活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Akt、PCNA阳性细胞数明显降低,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达明显升高,p-Akt、p-PI3K蛋白的表达明显降低,差异均有统计学意义（P＆0.05）。结论 BDNF可通过激活Akt信号通路减轻罗哌卡因引起的神经细胞损伤,从而调节神经细胞的增殖和凋亡。

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