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子宫内膜异位症不孕患者着床窗口期内膜组织中微小RNA的差异表达及其意义

         
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目的通过检测子宫内膜异位症（内异症）不孕患者着床窗口期子宫内膜组织中差异表达的微小RNA （miRNA）, 预测影响子宫内膜容受性的相关基因。方法收集2013年5—12月因"不孕症"就诊于北京大学第三医院生殖医学中心的患者, 选择其中与内异症相关的不孕患者（17例, 包括6例卵泡期内膜、11例着床窗口期内膜）作为内异症组, 因输卵管因素不孕的患者（19例, 包括7例卵泡期内膜、12例着床窗口期内膜）作为对照组。（1）两组患者各取3例着床窗口期内膜, 采用miRNA和mRNA芯片技术筛选, 联合数据库预测结果以及miRNA和mRNA的负调控关系, 得到与miRNA表达呈负相关的交集靶基因, 构建miRNA-mRNA共表达网络, 结合生物信息学方法预测子宫内膜容受性相关基因, 找到处于核心调控地位的miRNA。（2）采用逆转录（RT）-PCR技术检测两组（内异症组和对照组分别为14例和16例）子宫内膜组织中miR-142-5p、miR-146a-5p和miR-543的表达, 验证miRNA芯片技术筛查结果。结果 （1） miRNA和mRNA芯片技术筛选结果显示, 内异症组着床窗口期内膜组织中, 筛选出6个差异表达的miRNA, 其中miR-142-5p、miR-146a-5p、miR-1281、miR-940、miR-4634表达明显上调, miR-543表达明显下调;筛选出63个差异表达的基因mRNA, 其中CADM1、IL-10RA、ITGAL、LPAR5等58个mRNA表达明显上调, HLA-DRB1、3、4、5和SOHLH2等5个mRNA表达明显下调。联合基因测序结果、数据库预测结果以及miRNA和mRNA的负调控关系, 得到与miRNA表达呈负相关的交集靶基因36个, 构建miRNA-mRNA共表达网络, 发现miR-543处于网络的核心位置;Targetscan等数据库预测miR-142-5p、miR-146a-5p和miR-543可作用于HOX10、ITGAV、ITGB3、OPN、LIF、ESR、PGR、CDH1和MMP等多种子宫内膜容受性标志分子对应的基因。（2） RT-PCR技术检测显示, 内异症组着床窗口期内膜组织中miR-142-5p和miR-146a-5p的表达水平分别为8.3± 10.6、1.9±0.8, 对照组分别为1.1±0.6、0.9±0.4, 两组分别比较, 差异均有统计学意义（P=0.027, P= 0.015）, 与miRNA芯片筛查结果一致。内异症组卵泡期内膜组织中miR-543的表达水平（2.3±1.0）显著高于对照组（1.0±0.4, P=0.008）;但其着床窗口期内膜组织中miR-543的表达水平（1.2±0.6）与对照组（1.5±1.0）比较, 差异则无统计学意义（P=0.890）。结论内异症不孕患者着床窗口期内膜组织中存在多个差异表达的miRNA, 其中miR-142-5p和miR-146a-5p表达明显上调, 可能通过作用于多种子宫内膜容受性标志分子影响胚胎着床;内异症不孕患者着床窗口期内膜组织中miR-543的表达低于卵泡期, 提示miR-543可能是影响子宫内膜容受性的原因。

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