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TIZ基因表达下调对卵巢上皮性癌细胞生物学行为影响的体外实验研究

         
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目的探讨通过RNA干扰技术沉默TIZ基因的表达对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞生物学行为的影响。方法设计3对特异性针对TIZ基因的小分子干扰RNA（siRNA）,并转染入TIZ基因表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞中,采用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）技术检测siRNA片段对TIZ基因的沉默率,筛选最佳沉默率的siRNA片段构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA-TIZ-573重组干扰质粒,采用脂质体转染法将重组干扰质粒转染入SKOV3细胞（sh-TIZ-573/SKOV3细胞）,并设阴性对照细胞sh-NC/SKOV3、阳性对照细胞sh-GA/SKOV3。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长曲线,集落形成实验测定细胞生长能力,流式细胞仪检测细胞周期,细胞体外侵袭重建基膜实验、穿膜小室实验和体外黏附实验分别测定细胞体外侵袭、转移及黏附能力。结果 QRT-PCR技术检测显示,TIZ-573 siRNA片段下调TIZ基因表达的作用最明显,沉默率达62%,且成功构建pGPU6/GFP/NeosiRNA-TIZ-573重组干扰质粒并导入SKOV3细胞中使TIZ基因表达沉默。细胞生长曲线显示,TIZ基因表达沉默后的sh-TIZ-573/SKOV3细胞较对照细胞生长加快。sh-TIZ-573/SKOV3细胞在G0/G1期所占比例（34.9%）比sh-NC/SKOV3、sh-GA/SKOV3细胞少（分别为68.8%、63.4%）,分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。细胞集落形成实验显示,sh-TIZ-573/SKOV3细胞的集落形成率[（89.1±4.6）%]高于sh-GA/SKOV3、sh-NC/SKOV3细胞[（60.8±4.9）%、（57.0±2.6）%],分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。sh-TIZ-573/SKOV3细胞的侵袭率、转移率和黏附率分别为（48.5±1.7）%、（53.6±3.4）%、（64.9±5.0）%,在TIZ基因沉默前后侵袭、转移和黏附能力无明显改变（P＞0.05）。结论下调TIZ基因的表达对卵巢癌细胞生长有一定的促进作用,其可能发挥抑癌基因的生物学作用。

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